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4591.半滑舌鳎类胰岛素生长因子-Ⅰ的原核表达及活性分析
[农、林、牧、渔业] [2014-05-15]
根据半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Güther)类胰岛素生长因子-Ⅰ(IGF-I)基因的cDNA序列,设计引物扩增编码IGF-I成熟肽序列,此序列由210个碱基组成,包括B-C-A-D 4个功能域。利用PCR方法将扩增片段克隆到原核表达载体 pET-28a 上,得到重组质粒,将重组质粒导入到大肠杆菌 BL21( DE3)后经 IPTG 诱导产生 N端含6个组氨酸的融合蛋白。以SDS-PAGE电泳检测和SigmaScan软件分析获得的多肽,结果表明： IGF-I融合蛋白大小为11.4 kD, IPTG诱导3 h时目的蛋白表达量最高,占细菌总蛋白的58.5%,1 L菌液表达目的蛋白40.7 mg,主要以包涵体形式存在。利用Western-blotting方法验证融合蛋白可特异性的被6×His抗体识别。诱导表达后的菌液沉淀经6 mol/L盐酸胍变性、Ni2+离子亲和柱纯化和尿素梯度复性,获得大小为11.4 kD的纯化蛋白。细胞增殖实验表明, IGF-I融合蛋白可显著促进乳腺癌细胞MDA231细胞的增殖,具有生物学活性。本研究通过原核表达技术获得了体外重组的具有生物活性的半滑舌鳎IGF-I融合蛋白,结果可为半滑舌鳎生长调控技术研究提供基础资料。
关键词：半滑舌鳎;IGF-I;原核表达;生物活性;Cynoglossus semilaevis Güther;IGF-I;prokaryotic expression;bioactivity
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4592.贝类中3种组织血型抗原ELISA检测方法的建立与分型
[农、林、牧、渔业] [2014-05-15]
人类组织血型抗原(histo-blood group antigens, HBGAs)是诺如病毒(NoVs)的结合受体,本研究假设贝类中也存在类似的HBGAs并且特异性地富集NoVs,利用HBGAs单克隆抗体,建立贝类中3种HBGAs的ELISA检测方法,分析牡蛎(Crassostrea gigas)、缢蛏(Sinonovacula constricta)、菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)、紫贻贝(Mytilus galloprovincialis)、毛蚶(Scapharca subcrenata)、栉孔扇贝(Chlamys farreri)等6种双壳贝类中HBGAs的类型.结果显示,在上述6种贝类中都检测出 A型抗原,其中菲律宾蛤仔的检出率为11.6%(9/77),紫贻贝的检出率为28.1%(16/57),缢蛏样品为72.3%(47/65),栉孔扇贝为84.6%(58/69),其余贝类检出率为100%;只有牡蛎样品检出 H 抗原,检出率为30.7%(28/91);在缢蛏和毛蚶样品中检测出 B 型抗原,检出率分别为76.9%(50/65)和77.8(56/72).结果表明贝类中存在不止1种类型的HBGAs.
关键词：贝类;组织血型抗原;诺如病毒;酶联免疫吸附;单克隆抗体;shellfish;HBGAs;NoVs;ELISA;monoclonal antibody
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4593.草鱼出血病病毒vp6核酸疫苗的免疫效果评估
[农、林、牧、渔业] [2014-05-15]
为了评估草鱼出血病病毒(GCRV)vp6基因核酸疫苗的免疫效果,将vp6基因克隆进pFastBacTMDual载体杆状病毒的多角体蛋白(Ph)启动子下游,同时将团头鲂(Megalobrama amblycephala)β-actin启动子控制的vp6基因克隆进杆状病毒的P10启动子下游,获核酸疫苗载体pFastBac-FA-VP6-ph-VP6.按每尾分别注射疫苗载体10、30、60 μg的剂量免疫草鱼(Ctenopharyngodon idellus)(体长14 - 20 cm,体质量60 - 120 g),同设pFastBacTMDual载体(30 μg/尾)阴性对照组及空白对照组(0.4 mL/尾无菌水).于免疫后不同时间通过RT-PCR检测免疫鱼体中vp6基因的表达,并于免疫后第14、21、28、49、70天分别通过间接凝集反应检测血液中的抗体水平,并在免疫第21天感染GCRV评估免疫保护效果.结果显示,核酸疫苗免疫草鱼后,各免疫组均有抗体产生,抗体效价在免疫后第28天达到最高；攻毒后每尾注射疫苗载体10、30、60 μg组的死亡率分别为0％、0％、5％,pFastBacTMDual载体对照组和空白对照组分别为30％和100％.表明构建的核酸疫苗对草鱼病毒性出血病有较好的免疫保护效果.
关键词：草鱼出血病病毒；vp6基因；核酸疫苗；免疫；相对存活率
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4594.联合收获免耕直播机开沟分土装置抛土性能研究
[农、林、牧、渔业] [2014-05-15]
针对我国稻麦轮作区在作物收获后均可进行兔耕播种的作业要求,在原设计的稻麦联合收获开沟埋草多功能一体机的基础上,对开沟装置结构参数、运动参数及分土导流装置结构进行优化,利用开沟抛起的土块对免耕直播的种子进行覆盖.田间试验表明:优化改进后的开沟分土装置作业效果良好,作业后土垡边长不大于4 cm、碎土率达90％,抛土均匀性不小于85％,单侧平均抛土幅宽1.1～l.2m,抛土集中区平均覆土厚度2.3 cm,不仅达到开沟机械作业的质量标准要求,还能满足当地农艺上的覆土盖种要求.
关键词：联合收割机;免耕播种机;开沟装置;分土装置;改进设计;田间试验;combine harvester;no-till planter;ditcher;reflector;improvement design;field testing
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4595.达氏鲟视网膜早期发育及其相关机能
[农、林、牧、渔业] [2014-05-15]
本研究采用石蜡连续切片技术,对出膜后0~64 d 的达氏鲟(Acipenser dabryanus)视网膜结构、视觉特性及相关机能进行研究。结果显示,达氏鲟初孵仔鱼的视网膜没有分化,视单锥细胞在36 h 出现,视杆细胞在6 d 时出现,7 d 时视网膜各层分化完毕。最小分辨角由8 d 的13.26′下降到64 d 的3.37′,仔鱼发育到13 d 时表现出明显的视网膜运动反应。随着仔鱼发育,视单锥细胞及神经节细胞密度不断降低,视杆细胞密度不断增加,外核层细胞核与视锥细胞及神经节细胞数量的比值均不断增大。结果表明6~12 d 是达氏鲟视网膜结构快速发育和视觉特性发生明显变化的时期,这种变化与其生态变迁、趋光性及摄食方式的变化相适应。本研究旨在探明达氏鲟视网膜的发育特性及其相关机能特点,为开展规模化繁育与种群资源的保护提供理论依据。
关键词：达氏鲟;视网膜;早期发育;相关机能;Acipenser dabryanus;retina;ontogeny development;correlated function
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4596.北部湾花斑蛇鲻生物学特征的演化
[农、林、牧、渔业] [2014-05-15]
根据1959-1960年、1992-1993年、1997-1999年和2009-2010年北部湾底拖网渔业资源调查的生物学资料,对花斑蛇鲻(Saurida undosquamis)群体组成、生长和生殖力参数等生活史特征进行了研究.结果表明,花斑蛇鲻的平均体长从1959-1960年的185.5 mm下降到1992-1993年的163.1mm、1997-1999年的133.2 mm和2009-2010年的130.5 mm,相应地平均体质量分别为66.5 g、46.4 g、23.8 g和22.6 g.1959-1960年、1992-1993年、1997-1999年和2009-2010年间的Von Bertanaffy生长方程的渐近体长(L∞)、生长参数(k)和理论初始年龄(t0)分别为497.8 mm,0.26,-0.49; 424.1 mm,0.28,-0.48; 385.3 mm,0.33,-0.41和342.5 mm,0.39,-0.36.体质量拐点年龄(tr)分别从1959-1960年的4.05龄提前到1992-1993年的3.66龄、1997-1999年3.05龄和2009-2010年2.43龄.50％性成熟体长(L50)则从1959-1960年111.2 mm下降到1992-1993年的105.2 mm、1997-1999年的95.6 mm和2009-2010年的96.7 mm.对于同一体长组,当前花斑蛇鲻的个体相对生殖力比20世纪60年代上升了56.4％.花斑蛇鲻种群生活史特征参数的一系列变化表明,在捕捞引起进化背景下,北部湾花斑蛇鲻种群产生了适应性进化反应,种群明显趋向小型化和低龄化,生长速度加快,性成熟提前.
关键词：花斑蛇鲻；生物学参数；捕捞引起进化；北部湾
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4597.草鱼C1qC基因的克隆及表达分析
[农、林、牧、渔业] [2014-05-15]
为了研究C1qC基因在草鱼(Ctenopharyngodon idella)免疫过程中所起的作用,利用RT-PCR和RACE方法克隆获得了 C1qC 基因 cDNA 全长序列,经序列分析表明,所克隆的 C1qC cDNA 全长为916 bp,包括开放阅读框(open reading frame, ORF)735 bp,5′端非编码区(untranslated region, UTR)89 bp和3′端非编码区(UTR)92 bp.735 bp的ORF共编码244个氨基酸,相对分子量为26162.5 U.同源性分析表明,草鱼与斑马鱼(Danio rerio)的相似度最高,达到71%.经草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus, GCRV)诱导后,草鱼C1qC基因在鳃、皮肤、肌肉、肝、中肾、心脏、头肾等组织中的mRNA表达水平均显著上调.在草鱼胚胎发育的各个阶段都能检测到C1qC mRNA的表达,说明该基因可能在草鱼胚胎和鱼苗的免疫反应和早期发育中起重要作用.本研究将为今后在草鱼免疫功能方面深入研究C1qC基因提供基础资料.
关键词：草鱼;C1qC基因;克隆;表达;草鱼呼肠孤病毒;Ctenopharyngodon idella;C1qC gene;expression;grass carp reovirus
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4598.海湾扇贝南部亚种闭壳肌质量的双性状选择效应
[农、林、牧、渔业] [2014-05-15]
采用双性状选择方法在经群体继代大壳高选育的海湾扇贝(Argopecten irradians concentricus Say)南部亚种F3养殖群体中进行闭壳肌定向选育，以评价闭壳肌的选择效果和现实遗传力，为海湾扇贝南部亚种育种提供理论依据。结果表明，在以壳高为第一选择性状、体质量为第二选择性状、壳高选择压力为10%、体质量选择压力为1%情况下，正、负向选择组、对照组在产卵量、受精率、孵化率、幼虫期壳长增长率、中培期存活率、成体各形态参数等方面的差异不显著(P>0.05)；在稚贝育成率、养成期存活率、成体各质量性状等方面均存在显著差异(P对照组>负向选择组；正、负向选择组中，体质量与闭壳肌质量均出现较高的现实遗传力，且正向选择组高于负向选择组；双性状选择时，体质量与闭壳肌质量的当代遗传获得明显高于单性状选择结果。壳高和体质量对闭壳肌质量均具有密切的遗传相关，任何一个性状的选择均可对闭壳肌质量产生显著影响，双性状同时选择可对闭壳肌质量产生叠加效应，使闭壳肌质量性状的遗传进展达到最大。
关键词：海湾扇贝南部亚种;闭壳肌;选择效应;现实遗传力;Argopecten irradians concentricus(Say);adductor;selection effect;realized heritability
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4599.羟基马桑毒素及其3种衍生物对粘虫的拒食活性与生理指标的影响
[农、林、牧、渔业] [2014-05-15]
为比较羟基马桑毒素(tutin)及其衍生物(1,2,3)杀虫活性的差异,采用非选择性叶碟法分别测定其对试虫的拒食活性,采用比色法测定这4种化合物在亚致死剂量下(2.0mg·mL-1)粘虫的酯酶、2类保护酶和可溶性总糖在48h内的变化趋势.结果表明:在48h内的拒食活性衍生物2＞衍生物3＞衍生物1＞Tutin；Tutin、衍生物1和3可致粘虫的酯酶活性和可溶性总糖含量略升高,保护酶活性无明显变化；衍生物2可使试虫的酯酶活性,可溶性总糖含量和SOD活性显著升高.Tutin的2位羟基进行酰化加成改造后能显著提高其拒食活性,衍生物2是最优结构化合物.
关键词：羟基马桑毒素；衍生物；粘虫；拒食活性；生理指标
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4600.球孢白僵菌侵染光肩星天牛幼虫的扫描电镜及组织病理观察
[农、林、牧、渔业] [2014-05-15]
应用扫描电镜和组织切片法研究球孢白僵菌侵染光肩星天牛幼虫体壁的过程以及寄主中肠发生的病理变化.结果表明:接菌后48h,芽管平均长度达到3.08μm时即可侵入幼虫体表.随着侵染时间延长,芽管伸长形成菌丝,逐渐萌发生成新的分生孢子,在后期菌丝间出现丝状物和网状结构,这2种现象在国内外未见报道.分生孢子多数以芽管方式侵入表皮,也可以产生附着胞再侵染.组织切片显示:侵染3天的幼虫腹部体腔中脂肪体组织变得模糊,细胞核不明显,马氏管出现空泡并变形.中肠围食膜被分解消失,肠壁肌肉层向内皱褶,排列紊乱,出现破裂,肠腔内变浑浊.
关键词：球孢白僵菌；光肩星天牛；侵染过程；病理变化；扫描电镜
027-87841330