【目的】对紫花苜蓿(Medicago sativa L.cv.Zhongmu-1)stress-induced protein kinase gene 1(MsSIK1)进行克隆与表达研究,了解该基因的分子机制及其应用。【方法】以紫花苜蓿叶片总RNA为模板,根据同源克隆设计简并引物,利用RT-PCR结合RACE技术,获得MsSIK1的编码序列。利用同源性比对进行序列分析。通过SMART网站(http://smart.embl-heidelberg.de/)模拟该基因的蛋白结构。构建MsSIK1的亚细胞定位瞬时表达载体,使用基因枪转化法将MsSIK1与GFP在洋葱表皮细胞中融合瞬时表达并观察其亚细胞定位荧光信号。通过Real time-PCR分析MsSIK1在NaCl、ABA和干旱处理条件下的表达特征。利用农杆菌侵染方法获得转基因拟南芥植株,通过RT-PCR对转基因植株进行表达鉴定,获得转基因植株后,利用转基因株系进行盐处理进而对成苗期转基因拟南芥性状鉴定。在盐胁迫处理下,测定野生型与转基因株系的叶绿素含量、MDA含量进而验证该基因的抗盐功能。【结果】获得MsSIK1编码序列2 478 bp,编码825个氨基酸。该蛋白C端与多种植物激酶具有相当高的同源性,模拟蛋白结构发现该基因具有类受体蛋白激酶高度保守的丝氨酸/苏氨酸结构域、跨膜结构域和富含亮氨酸重复序列的膜外结构域。Real time-PCR分析表明该基因在NaCl、ABA和干旱处理条件下上调表达,其中在盐处理条件下,MsSIK1表达先升高后降低,在处理4 h时达到最大值(约为对照值的7倍)。在干旱胁迫处理时,MsSIK1受诱导表达增强明显,当处理2 h时表达量达到最大值(约为对照值的6倍);ABA处理时,MsSIK1被诱导表达明显,当处理3 h时表达量达到最大值,约为对照值的6.8倍。MsSIK1与GFP融合瞬时表达的洋葱表皮细胞中的荧光信号主要集中于质膜附近,转化空载体的洋葱表皮细胞中的荧光信号分布于细胞各个部位。转基因植株的RT-PCR鉴定表明,T1代6个株系中所得到的MsSIK1条带明显、亮度高,且T1-10中表达量最高;但在野生型中检测不到该条带,说明外源基因已经整合到拟南芥染色体中并能遗传到子代。成苗期转基因拟南芥盐处理后发现T3-2、T3-6、T3-10转基因株系较野生型植株长势好,说明MsSIK1的转入提高了拟南芥的抗盐性。与对照相比,转MsSIK1拟南芥在NaCl处理下,叶绿素含量下降较少,其中,野生型叶绿素含量降低了77%,T3-3降低了53%,T3-6降低了44%,T3-10降低了35%;同样盐胁迫下,3个转基因株系的MDA含量积累较少,其中,野生型MDA的含量是T3-10株系的1.3倍。【结论】MsSIK1作为一个类受体蛋白激酶受多种逆境胁迫诱导,该基因的过量表达提高了拟南芥的抗盐性。 

关键词：紫花苜蓿；MsSIK1；类受体蛋白激酶；盐胁迫；功能研究

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摩托车制动性能检测工作是保障道路交通安全的一项重要措施。相关检测机构广泛使用摩托车路试仪作为检测摩托车制动性能的仪器,然而目前国内尚缺少对路试仪进行检定的装置。针对摩托车路试仪的检定方法进行了探讨,进而研发了一种精度高、操作简单方便、性能可靠的路试仪检定装置。该装置以MSP430F149单片机为控制核心,主要包括电源模块、转速检测模块、步进电机驱动模块、键盘及显示模块等。对该装置的总体方案、系统硬件和软件设计、系统仿真调试及样机实验等进行了阐述。对于摩托车制动性能检测领域有着重要的现实意义,研制的检定装置将具有广阔的应用前景。

关键词：检定装置；MSP430F149单片机；步进电机；转速检测；光电编码器

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利用4 种常用大孔树脂( NKA － 9，AB － 8，D301Ｒ，D4020) 对Lipozyme TL 100L 进行固定化，并比较了固定化效果及4 种固定化脂肪酶对甘油解反应制备甘油二酯的影响。结果表明: 以弱极性大孔吸附树脂AB － 8 为载体固定化的Lipozyme TL 100L 在无溶剂体系中催化大豆油甘油解反应制备甘油二酯的效率最高; 当底物( 精炼大豆油与甘油) 摩尔比为1∶ 2，反应温度为50℃，AB － 8 大孔树脂固定化的Lipozyme TL 100L 加酶量为600 U/g 时，在甘油解反应6 h 后产物中甘油二酯含量基本达到平衡，为54． 39%，其中1，2 －甘油二酯含量为33． 87%，1，3 －甘油二酯含量为20． 52%。

关键词：固定化；脂肪酶；甘油二酯；甘油解

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采用后合成修饰技术将水杨醛锚装在金属-有机骨架化合物UMCM-1-NH2上，得到一种席夫碱功能化的多孔化合物UMCM-1-Sal，利用其孔道内的N，O原子易与金属离子配位的特点，捕获了一系列金属离子[Mg(Ⅱ)，Zn(Ⅱ)，Co(Ⅱ)，Ni(Ⅱ)，Cd(Ⅱ)，Fe(Ⅲ)，Cu(Ⅱ)]，并对比研究了它们的光致发光行为。结果表明，与UMCM-1-NH2相比，UMCM-1-Sal的荧光发射峰红移，荧光强度降低，捕获金属离子后其荧光强度又有所增强，其中捕获镁后的荧光增强最明显。

关键词：金属-有机骨架化合物；后合成修饰；Mg离子；荧光

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以高活性的2-甲氧/乙氧羰基-4-(4-氟苯基)-1,5-苯并硫氮杂A和B为模型化合物，设计合成了11个含氟杂衍生物3a~3k，考察了它们对白色念珠菌和新生隐球菌的抑菌活性。研究结果表明，2-甲氧/乙氧羰基-4-(2-氟苯基)/(3-氟苯基)/(2,4-二氟苯基)-1,5-苯并硫氮杂3a，3b，3d~3f对新生隐球菌有很强的抑菌活性，3c的活性中等，而7位氯代杂3g~3k基本无活性；上述杂对白色念珠菌均无活性。在此基础上，进一步测试了高活性杂3a，3b，3d~3f对新生隐球菌的抑菌浓度梯度、最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)，发现其MIC和MFC均远低于对照药氟康唑。为了考察杂3a~3f的药效基团，又设计合成了4类杂衍生物4a~4f，5a~5f，6a~6f和7a~7c，通过对其抑菌活性的评价，发现分子中2-甲氧/乙氧羰基和亚胺官能团对杂3a~3f的抑真菌(新生隐球菌)活性起关键作用，硫原子被氧原子或氮原子代替后原杂的活性降低。

关键词：1,5-苯并硫氮杂；抑菌活性；构效关系

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为获得系列α-1,2-葡聚寡糖，首先以蓝藻寡糖六糖、八糖、九糖和十糖为原料，在0.5 mol/L的三氟乙酸(TFA)中于95℃酸解9 min以脱去还原端果糖，经低压凝胶色谱分离纯化，用电喷雾离子化-碰撞诱导解离-串联质谱(ESI-CID-MS/MS)和基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-MS)鉴定和序列表征，获得了除去末端果糖的α-1,2-五、七、八和九糖;然后在0.5 mol/L的TFA中于95℃对混合蓝藻寡糖六糖和八糖酸水解45 min，用Bio-Gel P2凝胶柱对混合物进行分离和纯化，并通过ESI-MS和MALDI-MS对获得的每个寡糖组份进行表征，获得了聚合度为2，3，4和6的α-1，2-葡聚寡糖。本研究为利用糖生物芯片技术进行α-1，2-葡聚寡糖的功能筛选及分析其与靶标蛋白之间相互作用的特异性提供了葡聚寡糖物质基础。

关键词：蓝藻寡糖；脱果糖；α-1,2-葡聚寡糖；电喷雾串联质谱

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将胆固醇分子通过1个半胱氨酸侧链硫醚键和1个β-丙氨酸连接臂引入到所设计的非天然HR序列抗HIV融合活性多肽的C端和N端，合成了与天然C肽序列同源性很低的非天然序列的类肽抗HIV融合分子，以考察胆固醇修饰对非天然HR序列活性的影响，探讨克服耐药性的新思路。生物活性评价结果表明，胆固醇与HR肽C端结合物抑制HIV融合活性显著提高，而连接到N端的序列则完全失去了抗病毒活性，表明所设计的非天然序列确实具有与天然序列类似的作用机制。

关键词：HIV融合抑制剂；多肽；耐药性；非天然序列

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为满足卷烟生产设备高速传动的要求,对H1000超高速包装机组的差动式模盒机构的工作原理和运动特性进行了分析。该模盒机构采用凸轮差速传动和交替运动方式,由凸轮机构产生差速,通过行星齿轮差速器与主传动并联,以满足机构的间隙运动需求,降低高速运转时的冲击和噪声;利用两组模盒交替运动方式提高设备的工作效率。结果表明:差动式模盒机构可以较好地满足超高速包装机组的连续稳定运行的要求,加减速柔和,运动冲击小;设备全速运转噪声仅为79 d B,低于中速包装机组的83 d B;3年实测故障率为零,各零部件无明显磨损。对该模盒机构的原理、结构和运行特性研究可为新型超高速包装机组的技术研发提供参考。

关键词：卷烟；超高速；包装机组；模盒机构；差动式；槽轮式；交替运动

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【目的】克隆苹果(Malus domestica Borkh.)中抗苹果轮纹病相关的编码谷胱甘肽转移酶基因MdGSTU1,研究其在不同组织器官及不同逆境处理条件下的表达特性,为解析该基因的抗逆功能奠定基础。【方法】基于抗轮纹病相关的EST序列,通过在NCBI进行比对,得到一个谷胱甘肽转移酶(GST)基因相关的EST片段;然后在苹果基因组数据库中进行比对,获得该GST的编码框序列(coding sequence,CDS),同时,设计RACE引物,克隆该基因的UTR序列;利用MEGA5.0软件对该GST蛋白与拟南芥GST家族蛋白成员进行系统进化树分析,使用DNAMAN软件对该蛋白的分子量、等电点等进行预测,并对其氨基酸序列进行分析;采用荧光定量PCR检测该基因在不同组织中的表达以及该基因在盐、模拟干旱和苹果斑点落叶病原菌处理条件下的表达特性;克隆该基因的启动子,利用PlantCARE软件在线分析该基因启动子上的顺式作用元件。【结果】进化树分析显示该GST与拟南芥中GST家族的U亚家族成员亲缘关系最近,故被命名为MdGSTU1;MdGSTU1的CDS为666 bp,编码221个氨基酸残基,其蛋白分子量为25.41 kDa,等电点为5.28;RACE结果显示该基因3’UTR区域为135 bp;蛋白序列及结构分析显示,其与拟南芥GST家族蛋白相同,该蛋白也包含保守的谷胱甘肽-S-转移酶的N端及C端结构域;PCR结果显示,MdGSTU1在根、茎、叶、花、果各组织中均有表达,但根中的表达水平最高,同时,该基因能够被150 mmol.L-1NaCl和20%的PEG诱导表达,均在1 h时表达量达到最高值;另外,苹果斑点落叶病原菌也能诱导MdGSTU1的表达,表达量在病菌处理8 h时达到最大;启动子分析显示MdGSTU1启动子区域含有多个抗性相关的作用元件,其中包括ABA响应元件、厌氧响应元件、GA响应元件、SA响应元件、JA响应元件以及防御和逆境响应元件;此外,该启动子上还包含多个MYB转录因子结合位点。【结论】MdGSTU1属于植物tau亚家族(GSTU)成员,生物及非生物逆境胁迫均可诱导该基因的表达。

关键词：苹果；谷胱甘肽转移酶；克隆；序列分析；表达分析

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目的：研究依赖性受体Unc5H4诱导人神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)细胞系SH-SY5Y细胞凋亡而其配体Netrin-1抑制其凋亡诱导的作用。方法：人NB细胞系SH-SY5Y细胞中转染Unc5H4质粒，在有/无配体Netrin-1作用下进行平板克隆形成实验，探讨Unc5H4是否诱导细胞凋亡以及诱导细胞凋亡作用是否受Netrin-1蛋白作用的影响。进一步在SH-SY5Y细胞中表达Unc5H4，在阿霉素(ADR)刺激下，在有/无配体Netrin-1蛋白作用时检测Unc5H4蛋白条带的变化，即Unc5H4释放死亡结构域后的截断蛋白诱导细胞凋亡的变化。结果：Caspase-3活性检测结果显示，过表达Unc5H4可诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡，其相对Caspase-3活性(180%±20%)明显高于对照组(100%)，差异有显著统计学意义(P<0.01)。而加入Netrin-1组细胞的相对Caspase-3活性(112%±14%)明显低于无Netrin-1组(180%±20%)，差异有统计学意义(P<0.01)，与对照组(100%)相比差异无统计学意义。SH-SY5Y细胞中转染Unc5H4质粒，在同时受到ADR诱导的DNA损伤时，在无Netrin-1蛋白作用下，可以检测到Unc5H4截断蛋白(酶切死亡结构域，60 kDa)的表达，而Netrin-1能够阻止Unc5H4蛋白的截断，从而阻止其诱导凋亡的作用。结论：依赖性受体Unc5H4能够诱导人NB细胞凋亡，其配体Netrin-1能够通过阻止其发生蛋白截断而抑制其诱导凋亡的功能，从而使NB细胞获得增殖。

关键词：Netrin-1；Unc5H4；神经母细胞瘤；增殖；凋亡

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