构树ISSR反应体系的优化与建立
作者单位：廖声熙,崔凯,王海英,崔永忠,LIAO Sheng-xi,CUI Kai,WANG Hai-ying,CUI Yong-zhong(中国林业科学研究院资源昆虫研究所,云南昆明,650224)张鹏,袁首乾,ZHANG Peng,YUAN Shou-qian(中国林业科学研究院资源昆虫研究所,云南昆明650224;西南林业大学资源学院,云南昆明650224)
加工时间：2013-11-15
信息来源：林业科学研究
关键词：构树;ISSR;PCR反应体系;正交试验优化
摘 要：利用正交试验对Taq酶浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度和模板DNA浓度5个因素进行优化,从而建立了一套适宜构树的ISSR-PCR反应体系.在20 μL的反应体系中,各反应物的最适宜含量为:0.07 U·μL-1 TaqDNA聚合酶、0.35 μmol·L-1ISSR引物、0.3 mmol·L-dNTPs,2.0 mmol·L-Mg2+、1.2 ng· μL-1模板DNA.PCR扩增程序为:94℃预变性5min,94℃变性30 s,46℃退火45 s,72℃延伸2 min,40个循环.
027-87841330