人长链非编码RNA基因H19克隆、表达载体构建及对MCF-7细胞增殖的影响
关键词:长链非编码RNA;H19基因;基因克隆;瞬时转染;HEK-293T细胞;COS-7细胞;MCF-7细胞
摘 要:目的克隆人长链非编码RNA H19基因,构建表达载体,研究H19表达对MCF-7增殖的影响作用。方法制备乳腺癌MCF-7细胞总RNA,RT-PCR扩增长链非编码RNA H19全长序列,分子克隆至pc DNA3.1(-)真核表达载体;分别转染HEK-293T和COS 7细胞并行Real-time q PCR验证载体构建是否成功;转染H19表达载体入MCF-7细胞株,转染0、24和48 h后行MTS检测H19表达,同时设计siRNA小分子片段干扰H19的表达,观察对MCF-7细胞增殖活性的影响。结果成功克隆和构建了h H19-pc DNA3.1(-)表达载体;转染入MCF-7细胞48h后,H19过...
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