关键词：食品接触材料;多组分迁移物;人生长阻滞和DNA损伤诱导45α基因;遗传毒性评价
摘 要：目的 探讨基于人生长阻滞和DNA损伤诱导45α（GADD45α）基因的遗传毒性高通量筛选体系BlueScreen HC（BSHC）在食品接触材料多组分迁移物遗传毒性检测中的适用性。方法 将人GADD45α基因开放阅读框上游2000 bp序列作为启动子，采用分子克隆构建入嘌呤霉素和高斯荧光素酶（Gluc）双标记的慢病毒质粒pEZX-LvPG04中，并用慢病毒感染人淋巴母细胞TK6，获得稳转细胞系TK6-Gluc。以甲基磺酸甲酯(MMS，终浓度0,1.56,3.13,6.25,12.5,25.0和50.0 mg·L^-1)为非代谢活化条件下的阳性物质，环磷酰胺(CTX，终浓度0,0.78,1.56,3.13,6.25,12.5和25.0 mg·L^-1)为代谢活化条件下的阳性物质，二甲基亚砜(DMSO，终浓度0,0.35,0.69,1.38,2.75,5.5和11.0 g·L^-1)为阴性物质，分别在非活化和活化条件下验证构建的BSHC。将改性淀粉/聚对苯二甲酸-己二酸丁二醇酯（MS/PBAT）作为研究对象，采用体积分数4%乙酸及10%,20%,50%和95%乙醇作为食品模拟物，40℃、浸泡24 h获得5份MS/PBAT多组分迁移物，并用DMSO作为溶剂复溶得到5份多组分迁移溶液作为受试物。以终浓度为0,0.38,0.76,1.53,3.05,6.10和12.20 g·L^-1的不同受试物在活化和非活化2种条件下处理TK6-Gluc细胞。非活化条件下作用48 h；活化条件下，在添加体积分数1%大鼠肝S9代谢活化系统的同时，作用3 h后更换新鲜培养基，继续培养至48 h。处理结束后，采用CCK-8法检测细胞活性，同时采用Secrete-Pair^TMGaussia Luciferase Assay试剂盒检测培养基中Gluc化学发光强度。另外，采用终浓度为3.05和12.20 g·L^-1的不同受试物对鼠伤寒沙门氏菌TA98和TA100进行微量波动Ames试验以及对体外培养的中国仓鼠肺细胞CHL进行体外哺乳细胞染色体畸变试验，检测受试物的致突变和染色体畸变作用，与BSHC遗传毒性结果进行对比分析。结果 采用BSHC法，将相对细胞活性80%定义为生长抑制的最低有效浓度阈值，实验组相对细胞活性低于溶剂对照组的80%提示化合物引起细胞生长抑制。将实验组相对细胞活性低于溶剂对照组的30%定义为出现细胞毒性，此时将不考虑遗传毒性。在无细胞毒性前提下，活化条件下实验组Gluc化学发光强度大于溶剂对照组的1.8倍时，非活化条件下实验组Gluc化学发光强度大于溶剂对照组的1.5倍时，判定为遗传毒性阳性；反之认为无遗传毒性。与溶剂对照组相比，阴性物质DMSO所有浓度均未产生遗传毒性。非活化条件下，MMS 12.5,25.0和50.0 mg·L^-1产生遗传毒性；活化条件下，CTX 6.25,12.5和25.0 mg·L^-1产生遗传毒性。非活化条件下，MS/PBAT的95%乙醇迁移物6.10和12.20 g·L^-1和MS/PBAT的50%乙醇迁移物12.20 g·L^-1组细胞生长抑制，所有处理组均未观察到相对细胞活性低于30%的细胞毒性，且未观察到Gluc高表达，表明5种MS/PBAT多组分迁移物在非活化条件下均未产生遗传毒性。活化条件下，MS/PBAT的95%乙醇迁移物12.20 g·L^-1和MS/PBAT的4%乙酸迁移物6.10,12.20 g·L^-1组细胞表现出显著的生长抑制，所有处理组均未观察到相对细胞活性低于30%的细胞毒性，且未观察到Gluc高表达，表明5种MS/PBAT多组分迁移物在活化条件下均未产生遗传毒性。微量波动Ames试验结果表明，在活化和非活化条件下，MS/PBAT的5种多组分迁移物3.05和12.20 g·L^-1作用于TA98和TA100 2种菌株，致突变阳性孔的数量均不超过溶剂对照组的2倍，即均未产生致突变作用；作用于CHL细胞后的细胞染色体畸变率亦均无显著变化。结论 初步建立了基于GADD45α基因的遗传毒性高通量筛选方法BSHC，提示可用于食品接触材料多组分迁移物的体外遗传毒性评价，但仍需进一步探索其最低有效浓度，并应用更多种类混合物进行进一步验证。
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