关键词：慢性粒细胞白血病；ABL蛋白；酪氨酸激酶；药物筛选
摘 要：目的建立一种简单、稳定、高效分离纯化ABL酪氨酸激酶及其突变体ABLT315I的方法。方法 abl及其定点突变基因插入p ET-28a载体后,与p GEX6P-1-ptp-1b共同转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中进行培养,加入异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导ABL酪氨酸激酶及其突变体的表达,亲和层析和凝胶过滤层析纯化蛋白,SDS-PAGE分析蛋白纯度与相对分子量,BCA法测定蛋白浓度,ATP/NADH偶联法测定蛋白激酶活性。结果 SDS-PAGE显示ABL及ABLT315I蛋白具有很高的纯度,并且其浓度分别达到28 mg/L(LB菌液)和20 mg/L(LB菌液)。2种目的蛋白在体...
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