关键词：HIV-1;整合酶;3'端加工;荧光共振能量转移;影响因素;优化;抑制剂
摘 要：目的建立与优化HIV-1整合酶3'端加工抑制剂筛选方法。方法利用荧光共振能量转移原理建立筛选方法,用DNaseⅠ切割底物DNA确定底物检测波长,在该检测波长下,对缓冲液成分、底物浓度、酶浓度、金属离子浓度等影响整合酶活性的条件进行优化,并用阳性药物雷特格韦和杨梅黄素进行方法验证。结果检测波长为495 nm/525 nm,使用缓冲液1、底物浓度500 nmol·L-1,整合酶浓度1μmol·L-1,镁离子浓度20 mmol·L-1时整合酶3'端加工活性最强。在此反应条件下雷特格韦和杨梅黄素能有效地抑制整合酶3'端加工活性。用所建立的方法筛选到2个有较强抑制整合酶3'端加工活性的抑制剂。结论该文成...
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