关键词：载体构建；Cry1Ac基因；Cry3Aa基因；双Bt741杨；抗虫性
摘 要：以含有Cry3Aa基因的重组质粒pBCC3为基础,利用PCR和DNA重组技术,从pBCC3中克隆出抗虫基因Cry3Aa,将其正向插入载体pCAMBIA1305的CaMV35S启动子和NOS终止子之间,构建成pCAMBIA1305 -Cry3 Aa植物表达载体,并导入根癌农杆菌EHA105.采用农杆菌介导的遗传转化法,将Cry3Aa基因转入已转Cry1Ac+ APl基因的741毛白杨无性系pB29中,获得转双Bt基因的741杨.在含潮霉素的培养基中进行多次继代筛选,获得抗性稳定的无性系9个,编号为pCCA1-pCCA9.采用特异引物分别对转基因植株进行PCR检测,结果显示Cry1Ac基因稳定存在于pB29中,Cry3Aa基因已整合到各无性系的基因组DNA中.ELISA毒蛋白检测,转基因株系都有Cry1Ac和Cry3Aa杀虫蛋白表达.用转基因植株叶片进行柳蓝叶甲(鞘翅目)和美国白蛾(鳞翅目)室内饲虫试验结果表明,转基因植株具有双抗性.根据对测试昆虫的致死率划分高中低3个抗性水平,其中pCCA2,pCCA5,pCCA6,pCCA9具有双高抗；pCCA3,pCCA4和pCCA7对柳蓝叶甲表现出中、低抗性,对美国白蛾则高抗；而pCCA1表现对美国白蛾的极低抗性,对柳蓝叶甲则高抗.