毛白杨4-香豆酸:辅酶A连接酶(4CL3)的酶学特征研究
作者单位：饶国栋,RAO Guo-dong(国家林业局林木培育重点实验室,中国林业科学研究院林业研究所,北京 100091;北京林业大学,北京 100083)张永卓,魏弘宜,蒋湘宁,陆海,ZHANG Yong-zhuo,WEI Hong-yi,JIANG Xiang-ning,LU Hai(北京林业大学,北京,100083)张建国,ZHANG Jian-guo(国家林业局林木培育重点实验室,中国林业科学研究院林业研究所,北京 100091)
加工时间：2013-11-15
信息来源：林业科学研究
关键词：4-香豆酸;辅酶A连接酶;HPLC-MS;原核表达;毛白杨;4CL;HPLC-MS;prokaryotic expression;Populus tomentosa
摘 要：为了进一步研究杨树4CL基因,以毛白杨为材料克隆到一个新的毛白杨4CL3基因.生物信息学分析结果显示:该基因和其他4CL基因一样含有4CL基因家族2个保守框Box Ⅰ和Box Ⅱ.将4CL3基因连接至原核表达载体pQE30,表达纯化后测定其蛋白的比活力,结果显示:4CL3基因对不同底物表现出了不同的催化效率.对该基因的最适温度和最适pH值测定后发现:4CL蛋白的最适温度为40℃,最适pH值为8.5,且在pH =9.0时有60％的活力.采用HPLC-MS的方法,分析了4CL3蛋白对混合底物的催化情况,结果显示:在混合底物下,4CL3蛋白对4-香豆酸、阿魏酸和肉桂酸都表现较高的活力,而对芥子酸和咖啡酸没有活力.
027-87841330