关键词：Toll样受体4;RNA干扰;RNA,小分子干扰;肌,平滑,血管;逆转录聚合酶链反应;免疫印迹法
摘 要：目的设计合成有效的靶向Toll样受体4(TLR4)基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,并筛选出TLR4基因稳定沉默的血管平滑肌细胞(SMC)。方法依据RNA干扰(RNAi)序列设计原则,以TLR4基因为靶基因,合成3对小发夹RNA(shRNA)寡核苷酸链,经退火、与线性化pSilence 2.1-U6 neo质粒连接,酶切及测序进行鉴定。脂质体法转染血管SMC,新霉素(G418)加压筛选并收集稳定表达质粒的SMC。RT-PCR及Western blot法检测收集的SMC中TLR4 mRNA和蛋白表达,以确定siRNA对TLR4的抑制效率。结果测序鉴定插入的发夹样序列正确,成功构建了TLR...
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