关键词：宇佐美曲霉;阿魏酸酯酶A;基因克隆;表达;毕赤酵母;酶学性质;Aspergillus usamii;feruloyl esterase A;gene cloning;expressing;Pichia pastoris;enzymatic characterization
摘 要：本研究通过RT-PCR技术从宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001中克隆了编码阿魏酸酯酶A的成熟肽cDNA (AusfaeA),构建重组表达质粒pPIC9K-A usfaeA,将其经Sac Ⅰ线性化后转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,通过抗G418筛选获得高拷贝重组子GS115/A usfaeA,用甲醇诱导表达重组阿魏酸酯酶(reAusFaeA).SDS-PAGE显示,纯化后的reAusFaeA为单一条带,其表观相对分子质量为36000;以阿魏酸甲酯为底物,经高效液相色谱法测定,该酶的酶活为29.4 U/mg; reAusFaeA的最适反应温度为45℃,并在45℃以下稳定;最适反应pH为5.0,在pH 4.0～6.0范围内稳定;多数测定的金属离子及EDTA对该酶的活性影响不大.结果表明在P.pastoris中成功实现了AusfaeA的异源表达,该重组酶优良的酶学性质表明其具有较大的工业应用潜力.