禾本科植物内生真菌研究13:禾本科植物内生真菌的分离鉴定及基因组DNA的快速提取
关键词:禾本科植物内生真菌;基因组DNA的提取;NRPS基因;PCR扩增;序列比对
摘 要:调查我国7省12个不同地区的禾本科植物内生真菌,经分离、培养后鉴定得到2种Epichlo(e)属和4种Neotyphodium属内生真菌.采用改良的QS( improved quick and safe,IQS)法进行禾本科植物内生真菌基因组DNA的提取,并通过PCR进行验证.以生长在平板上的菌丝为起始材料,仪器要求简单、操作简便,快速安全、省时省力,整个提取过程大约40 min.该方法和常规SDS法相比,时间缩短到2周,为原来的1/4.以IQS法提取的DNA为模板,检测禾本科植物内生真菌中的NRPS基因,并在NCBl上进行比对分析,发现与已有的NRPS基因高度相似.这种快速提取法所获得的基因组DNA质量高,可用于后续PCR、基因克隆及其他高通量测试,特别适合获取大量真菌菌株基因组DNA时使用.