关键词：氨肽酶;丁二酸酐;化学修饰;稳定性;动力学;aminopeptidase;succinic anhydride;chemical modification;stability;kinetics
摘 要：采用丁二酸酐(SA)对经硫酸铵盐析和截留相对分子质量30000的超滤膜分离提取后的氨肽酶(AE)在优化条件下进行化学修饰,SA对AE的平均氨基修饰率为55.86％,酶活保留率为105.81％;修饰后的氨肽酶紫外吸收光谱发生一定红移,圆二色谱分析其二级结构中无规卷曲比例有一定的增加,α螺旋折叠以及β转角的含量有所下降,说明修饰后的氨肽酶空间构象有一定改变;修饰后的氨肽酶,70℃保温5h后仍然能保留70％以上的活性,与修饰前同等条件下酶活残留35％相比,其热稳定性显著提高.修饰后的氨肽酶动力学参数Km从1.0 mmol/L降低到0.75 mmol/L,表明其对底物的亲和力有明显的提高.此外,修饰后的氨肽酶最适温度和最适pH值也有一定的变化.结果表明SA化学修饰是一种可明显提高枯草芽孢杆菌氨肽酶与底物的亲和力及其热稳定性的有效方法.