关键词：草鱼呼肠孤病毒；HZ08株；FQ-PCR；检测方法
摘 要：草鱼出血病是危害中国淡水养殖最为重要的病害之一,其病原为草鱼呼肠孤病毒(grass carp hemorrhage virus,GCRV),其中,HZ08株是当前引起草鱼出血病的主要流行毒株.为建立一种快速、灵敏、特异的草鱼呼肠孤病毒主要流行株检测方法,本研究利用草鱼呼肠孤病毒HZ08株S7基因保守区,设计了一对能特异性扩增154 bp片段的引物和TaqMan探针,用含有S7基因全长的重组质粒PAVX1-S7作为标准品,构建质粒拷贝数与CT值的标准曲线,并对该方法的特异性、可重复性、敏感度进行评价.结果显示:标准曲线在6.0×1010～6.0拷贝数之间有很好的线性关系(r=0.999)；实时荧光定量PCR最少可检测到6个阳性质粒,有较高的敏感性；试验内及试验间变异系数分别为0.82％与0.41％～ 0.52％,重复性强；对水生动物其他病毒均无扩增反应,具有很好的特异性.应用该方法对采集的32份草鱼出血病样品进行检测,其中28份为阳性,而以常规RT-PCR检测同样的样品,仅23份为阳性.本研究建立的草鱼呼肠孤病毒流行株实时荧光定量PCR检测方法在特异性、灵敏度、重复性方面具有较好的测试结果,在GCRV的快速检测和病毒初步定量中应用前景乐观.