关键词：谷氨酸脱羧酶；γ-氨基丁酸；克隆表达；亲和层析；细胞转化
摘 要：谷氨酸脱羧酶(GAD)是功能因子γ-氨基丁酸(GABA)生物合成过程中的重要酶.为了得到一种有高效活性的GAD基因工程菌,克隆到一种GAD基因,来源于微生物Lactococcus lactis subsp.lactis IL1403.以pET-22b(+)为载体质粒,Escherichia coli BL21 (DE3)为宿主细胞,构建了基因重组菌,IPTG可诱导目的重组GAD过量表达；经亲和层析纯化的重组蛋白质样品进行SDS-PAGE分析,在约54 000处出现显著的特征蛋白质条带；活性检测结果表明,该重组GAD的转化活性比野生菌株有明显提高,野生菌株经5h细胞转化,反应底物转化率为55.8％,而工程菌20 min后转化率达到82.1％,30 min后转化可达到98.3％.