关键词：血管内皮生长因子受体；基因表达；酪氨酸激酶；克隆
摘 要：目的 克隆人血管内皮细胞生长因子(VEGF)受体1酪氨酸激酶(VEGFR1/Flt-1)基因,构建其表达载体,为其应用研究奠定基础.方法 应用RT-PCR技术,对可溶性血管内皮细胞生长因子受体1(sVEGFR1/sFlt-1)胞外区前四个结构域基因片段进行扩增,亚克隆至pUC18质粒,进行测序后,建立其表达载体,获得重组质粒pSGL-gpp-F,并将其转化至Streptomyces lividans TK24,获得基因工程菌株pSGLgpp-F,对其培养上清液进行SDS-PAGF及Western blot分析.结果 在信号肽gPP的引导下,sFlt-1在S.lividans中获得成功分泌表达,且表达的sFlt-1具有和配基VEGF结合的生物学活性,但在信号肽vis的控制下,未获成功表达.结论 sFlt-1经分离提纯后,可用于与抑制血管生成相关的疾病的研究,而利用重组sFlt-1建立VEGF拮抗剂筛选模型,对于从组合化学库等天然来源的化合物中,提取高通量、大规模药物的筛选提供了可能.