关键词：枯草芽孢杆菌;α-乙酰乳酸脱羧酶;耐低温;双乙酰;Ni柱亲和层析;酶学性质
摘 要：从Bacillus subtilis L5-20染色体上克隆得到ALDC基因alsD,构建重组表达载体pMA5-alsD-His,将其转化到B.subtilis WB600中.SDS-PAGE结果显示ALDC在重组B.subtilis WB600中成功表达,其相对分子质量(Mr)为32×103.采用Ni柱亲和层析纯化重组ALDC,所得纯酶的比酶活为272.3 U/mg,总回收率为89.8％.该重组ALDC最适反应温度仅为25℃,在20～35℃范围内均表现出较高的活性.Ni2+对ALDC有一定的激活作用,Fe3+使ALDC活性完全丧失.经摇瓶培养,重组菌的ALDC酶活为27.0 U/mL,约为出发菌酶活的70倍.经5L的发酵罐发酵放大试验,ALDC酶活最高可达75.9 U/mL.