关键词：缺氧复氧；氧化应激；早期生长反应基因-1；c-Jun氨基末端激酶；心肌细胞
摘 要：目的探讨心肌细胞缺氧复氧(H/R)时是否存在异常的ROS/JNK/Egr-1信号通路。方法将培养的H9c2心肌细胞随机分为以下组别:对照(control)组、control+ROS激活剂黄嘌呤氧化酶/次黄嘌呤(con+XO/HX)组、H/R组、H/R+ROS清除剂依达拉奉(EDA)组、H/R+ROS清除剂N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)组、H/R+JNK抑制剂SP600125组。建立心肌细胞H/R模型,采用不同浓度的EDA(2×10-6、2×10-5、2×10-4M)、NAC(5×10-4、2×10-3M、8×10-3M)、XO/HX(1m U/m L/1.2×10-4M,3m U/m L/3.6×10-4M,5m U/m L/6.0×10-4M)、SP600125(2×10-5M)处理细胞。流式细胞仪法检测H9c2心肌细胞内ROS水平。Western blot方法检测心肌细胞Egr-1、p-JNK、JNK蛋白表达的变化。结果 H/R组ROS水平及Egr-1蛋白表达均显著高于control组(P<0.05);2种中、高浓度的ROS清除剂EDA和NAC均能明显降低H/R所致的ROS的高水平和Egr-1蛋白的高表达(均P<0.05)。而2种低剂量的ROS清除剂对H/R所致的Egr-1蛋白表达以及ROS水平的影响差异无统计学意义。ROS水平与Egr-1蛋白表达呈高度正相关(r=0.91,P<0.01)。XO/HX各浓度组JNK激活程度显著高于对照组,且随着XO/HX浓度的增加,JNK激活程度越明显(均P<0.05)。H/R组JNK激活水平显著高于control组,使用ROS清除剂EDA与NAC和JNK抑制剂后,JNK活性明显降低(P<0.05)。H/R组Egr-1蛋白表达水平显著高于control组,而JNK抑制剂可以显著抑制H/R所致Egr-1蛋白的高表达(P<0.05)。结论 H/R可导致H9c2心肌细胞ROS/Egr-1信号通路激活,JNK的活化于此通路中起了重要的介导作用。