关键词：胆固醇氧化酶；大肠杆菌；核黄素；异咯嗪；亲和分离
摘 要：建立了从重组菌中高效亲和制备胆固醇氧化酶的方法,将一种源自Brevibacterium sp.(DQ345780)的胆固醇氧化酶基因转入Escherichia coli BL21 (DE3)表达,,选择核黄素-5' 磷酸(FMN)及7-氯-异咯嗪作为亲和配体,构建胆固醇氧化酶亲和制备介质.通过两种介质的一步亲和吸附,获得纯度较高的胆固醇氧化酶样本,蛋白回收率分别为9.4％与9.9％(质量百分比),活性回收率分别为85.2％与93.4％(活性百分比).使用SDS-PAGE分析,纯化得到蛋白分子量为约50000,纯度分别为98.0％与97.5％(纯度百分比).通过静态吸附分析,胆固醇氧化酶相对两种亲和介质的最大理论吸附值分别为71.0与78.5 mg/g介质；解离常数分别为12.8和7.3 μg/g介质.