关键词：枯草芽孢杆菌表达系统;分泌表达;耐高温嗜热内切-1,4-β-木聚糖酶;Bacillus subtilis expression system;expression and secretion;thermophilic endo-1,4-β-xylanase
摘 要：首先根据Thermopolyspora flexuosa的内切-1,4-β-木聚糖酶基因设计了引物,PCR扩增成功后进行酶切消化,连接载体质粒pHT43,经大肠杆菌DH5α扩增后,挑选阳性克隆,经菌体PCR及测序验证后,将基因序列测序正确的质粒大量抽提,经过转化导入枯草芽孢杆菌Bacillus subtilius WB800N宿主,培养并经过1 mmol/L IPTG诱导表达后,发酵胞外上清经SDS-PAGE电泳证明重组蛋白质成功获得表达.其相对分子质量为27 kD,最适反应温度为80℃,最适反应pH为6.0.由此得知,分泌表达的嗜热内切-1,4-β-木聚糖酶的枯草芽孢杆菌工程菌株构建成功,这为未来该酶的产业化生产奠定了基础.