关键词：枯草芽胞杆菌;内切葡聚糖酶;易错PCR;酶学性质;Bacillus subtilis;endoglucanase;error-prone PCR;enzymatic properties
摘 要：近年来随着纤维素酶在食品加工工业中具有广阔应用前景,而纤维素酶的工业应用一直受酶活性低,成本高的限制.为了提高中性内切葡聚糖酶的活性,作者利用易错PCR技术对来自枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)C-36的内切葡聚糖酶基因进行定向进化研究,构建了在大肠杆菌中的突变体库.通过刚果红平板筛选,获得了酶活性提高的突变株F-1O,活力比亲本酶提高4.2倍.序列分析表明:F-10有5个碱基发生突变,两个氨基酸突变:D212V和T307S.SDSPAGE条带,表明基因表达正确,而表达量较原始菌株显著增加.酶学性质分析,表明该酶的最适反应pH为5.6,最适反应温度为45℃,在pH 4.5～10.0范围内50℃保温30 min可保持80％的剩余酶活,在60～75℃酶活力相对稳定,可保持在最高酶活的80％以上,当温度高于75℃时,酶开始变性失活,酶活力迅速下降.研究获得了酶活性提高的内切葡聚糖酶菌株,为进一步在分子水平研究内切葡聚糖酶的功能和其应用打下了基础,也为高酶活酶分子在其他高表达系统的表达提供了基础材料.