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重组人转化生长因子β1原核表达及多克隆抗体制备
作者:刘洁婷;吴丹;刘海峰;初彦辉;郭冉 作者单位:牡丹江医学院黑龙江省抗纤维化生物治疗重点实验室,黑龙江牡丹江157011;牡丹江医学院生理教研室,黑龙江牡丹江157011 加工时间:2014-05-15 信息来源:《中国生化药物杂志》
关键词:转化生长因子β1;抗纤维化;原核表达;多克隆抗体
摘 要:目的 克隆人转化生长因子β1( TGF-β1)基因,原核表达TGF-β1蛋白,制备兔抗人TGF-β1多克隆抗体.方法 应用RT-PCR技术扩增人TGF-β1基因序列,构建pET-28a-TGF-β1重组质粒.转化至E.coli BL21( DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达.Western-blot检测目的蛋白的抗原性.免疫新西兰白兔,获得兔抗人TGF-β1多克隆抗血清.饱和硫酸铵盐析法纯化多克隆抗体,间接ELISA法检测多克隆抗体效价,Westernblot技术进行抗体特异性检测.结果 获得了TGF-β1编码序列和表达载体,目的蛋白主要存在于超声破碎后的包涵体中;经Western-blot检测目的蛋白存在抗原性;获得纯化的兔抗人多克隆抗体效价达1:10 000.结论 获得的兔抗人TGF-β1多克隆抗体效价较高,具有良好的特异性.
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