关键词：苏丹红;酶免疫测定;多克隆抗体,辣椒粉;Sudan Ⅰ;ELISA;polyclonal antibody;chili powder
摘 要：为了检测食品中非法添加物苏丹红,采用重氮化法合成了2种苏丹红Ⅰ的衍生物,通过液相色谱-质谱(LC/MS)鉴定后,分别将两种衍生物与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)以及卵清蛋白(OVA)偶联制备完全抗原.紫外光谱表征结果证明衍生成功.将制备的BSA络合物做为免疫原免疫兔子,制备了多克隆抗体.采用方阵法确定了抗体和包被抗原的稀释比例.对影响酶免疫检测方法(ELISA)的因素包括包被液,封闭液,样品稀释液,抗体稀释液,反应时间等进行了优化.在最适反应条件下,以苏丹红质量浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标建立了抑制曲线,线性范围为0.3～23.4 ng/mL,苏丹红Ⅰ的半数抑制率(IC50)为3.0 ng/mL,检测限(LOD)为0.1 ng/mL.交叉反应测试表明,与对位红交叉反应率为140％;与苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红G的交叉反应率分别为1.1％,6.85％,6.5％;与苏丹红Ⅳ的交叉反应率＜0.1％.以辣椒粉为样本,在5 ng/g和20 ng/g添加水平下得到回收率分别为90.4％和96.0％,变异系数分别为1.8％和4.9％.