关键词：机械牵拉;人支气管上皮样细胞;转化生长因子-β1;成纤维细胞生长因子-2;信号通路
摘 要：目的研究机械牵拉人支气管上皮样(16HBE)细胞对转化生长因子-β1(TGF-β1)、成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)表达的影响及其相关信号转导机制。方法采用Flexcell-4000细胞柔性基底加载装置牵拉16HBE细胞,牵拉应力为15%,频率为1 Hz,加载时间分别为:0.5 h、1 h、1.5 h、2 h。选择TGF-β1、FGF-2和Ca2+相对表达较高的一组以经典瞬时感受器电位1(TRPC1)抑制剂SKF 96365、蛋白激酶C(PKC)抑制剂HA-100作为干预因素。将细胞分为不予以机械牵拉的空白对照组、机械牵拉组、机械牵拉+SKF 96365组、机械牵拉+HA-100组。应用Western检测TGF-β1、FGF-2蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测TGF-β1、FGF-2 mRNA的表达,流式细胞术检测细胞内Ca2+荧光强度。结果16HBE细胞在15%牵拉应力作用下,与对照组相比,4个时间点的TGF-β1蛋白和mRNA、FGF-2蛋白和mRNA、胞内Ca2+荧光强度均显著升高(p(27)0.05),作用0.5 h时其增幅最大,作用1 h出现降低,1.5 h、2 h表达量又逐渐升高。对0.5 h机械牵拉组予以SKF 96365、HA-100干预后,其TGF-β1、FGF-2 mRNA和蛋白的表达,以及Ca2+内流均较单纯牵拉组降低(p(27)0.05)。结论机械牵拉可导致16HBE细胞气道重塑相关因子表达增加,其信号通路可能与机械牵拉引起PKC活化,进一步激活TRPC1,引起Ca2+内流有关。
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