关键词：蜡样芽胞杆菌;等温扩增;实时荧光RPA;检测
摘 要：研究的目的是建立一种简便快速的蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)检测方法。根据GenBank中蜡样芽胞杆菌16S RNA序列设计特异性引物和exo探针,建立了一种实时荧光重组酶聚合酶扩增方法,在39°C恒温下仅需20 min即可完成检测。该方法特异性扩增蜡样芽胞杆菌16S RNA基因片段,对其他芽胞杆菌和非芽胞杆菌无扩增;以蜡样芽胞杆菌基因组DNA作为模板,该方法的检测灵敏度为1.0×10-3 ng/μL,同已发表的real-time PCR方法一致。人工污染实验表明,当大米饭中蜡样芽胞杆菌污染量≥1.5×104 CFU/g时,即可通过real-time RPA方法检出,所需时间仅为6~13 min;而当污染量≥1.5×105 CFU/g时,才能通过real-time PCR方法检出,所需时间至少为30 min(Ct值为20~31之间)。
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