关键词：松材线虫；SCAR标记；特异引物；检测技术
摘 要：将松材线虫RAPD特异片段OPM05-X21.进行分离、回收,与载体pGEM·-T Vector连接,转化大肠杆菌并培养,对目标克隆测序.根据测序结果,用Oligo5.0软件设计引物,正向引物为MmF2(5′-CGGGT CATGG CTGGAgGTAT CGT-3′),反向引物为M05R1(5′-TGGCT CAATGgCAAAtCCTTCGTA-3′),成功地将松材线虫特异片段OPM05-X2100通过引物对M05 F2/R1转化为SCAR-m05-X600.运用SCAR标记引物M05F2/R对枯死松树体内分离的92份线虫样本的DNA进行标记,并对单条线虫经简易方法提取的DNA进行检测.结果表明:引物组合对所有81份松材线虫株系均扩增出一条600bp的清晰、明亮的条带,而对8份拟松材线虫、1份霍夫曼尼伞滑刃线虫、1份大核滑刃线虫、1份长尾属线虫均无扩增产物.该对引物可以检测单条松材线虫.利用这对特异引物组合可构建松材线虫检测试剂盒,实现对松材线虫的快速检测的目标.