应用SOEing方法构建SOD1-G93A的真核表达载体
作者单位：陆玉成,苏全平,尤翠平,王龙,王富敏(山东省临沂市人民医院神经病学实验室 276000)车峰远,于继徐(山东省临沂市人民医院神经病学实验室 276000; 山东省临沂市人民医院神经内科 276000)
加工时间：2014-05-15
信息来源：天津医药
关键词：超氧化物歧化酶;点突变;质粒;DNA,重组;肌萎缩侧索硬化;重叠区扩增基因拼接法
摘 要：目的：构建铜/锌超氧化物歧化酶（Cu/Zn superoxide dismutase, SOD1）-G93A的真核表达载体。方法应用重叠区扩增基因拼接法（SOEing）分别扩增前段M1基因与包含突变位点的后段M2基因，然后将2段基因拼接起来，得到SOD1-G93A基因，并克隆至pcDNA3.1(-)真核表达载体上。结果成功扩增出SOD1-G93A基因，测序结果与GenBank完全一致；对重组质粒SOD1-G93A-pcDNA3.1(-)进行双酶切鉴定，测序结果与预期完全一致。结论成功构建了SOD1-G93A-pcDNA3.1(-)真核表达载体。
027-87841330