应用SOEing方法构建SOD1-G93A的真核表达载体
作者单位:陆玉成,苏全平,尤翠平,王龙,王富敏(山东省临沂市人民医院神经病学实验室 276000)车峰远,于继徐(山东省临沂市人民医院神经病学实验室 276000; 山东省临沂市人民医院神经内科 276000)
加工时间:2014-05-15
信息来源:天津医药
关键词:超氧化物歧化酶;点突变;质粒;DNA,重组;肌萎缩侧索硬化;重叠区扩增基因拼接法
摘 要:目的:构建铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase, SOD1)-G93A的真核表达载体。方法应用重叠区扩增基因拼接法(SOEing)分别扩增前段M1基因与包含突变位点的后段M2基因,然后将2段基因拼接起来,得到SOD1-G93A基因,并克隆至pcDNA3.1(-)真核表达载体上。结果成功扩增出SOD1-G93A基因,测序结果与GenBank完全一致;对重组质粒SOD1-G93A-pcDNA3.1(-)进行双酶切鉴定,测序结果与预期完全一致。结论成功构建了SOD1-G93A-pcDNA3.1(-)真核表达载体。