关键词：树突细胞;乳腺肿瘤;细胞骨架;角蛋白质类;细胞凋亡;循环肿瘤细胞;表皮细胞黏附分子;细胞因子诱导的杀伤细胞;dendritic cells;breast neoplasms;cytoskeleton;kerat;apoptosis;circulating tumor cells,epidermal cell adhesion molecule;cytokine-induced killer cells
摘 要：目的：观察负载抗原的树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对富集培养乳腺癌循环肿瘤细胞（CTCs）的细胞毒作用。方法将有CTCs的乳腺癌患者外周血单个核细胞，磁珠分选富集表皮细胞黏附分子（EpCAM）+乳腺癌CTCs体外培养，并用巢式PCR、细胞免疫荧光成像（CK8/18）、细胞免疫组化（CK8/18、CK19）方法进行鉴定，分选后EpCAM-细胞常规诱导DC及CIK；制备乳腺癌CTCs全冻融抗原（Ag）冲击DC，分Ag-DC-CIK组、DC-CIK组、DC组、CIK组。台盼蓝拒染法动态监测CIK细胞增殖情况，流式细胞术分析细胞免疫表型，MTT法检测对乳腺癌CTCs的杀伤活性，流式细胞术检测诱导乳腺癌CTCs的早期凋亡率，光镜及透射电镜观察细胞形态及超微结构。结果磁珠分选富集后EpCAM+细胞巢式PCR可见CK19 mRNA条带表达，经体外培养后胞浆染色CK8/18+、CK19+，CK-FITC/DAPI免疫荧光染色见胞浆蓝荧光/核绿荧光的CK8/18阳性细胞。DC与CIK共培养细胞增殖活性明显大于单独培养的CIK（P＜0.001），DC免疫表型CD1α、CD83+CD86+、CD83+CD11C+、CD86+CD11C+及CIK免疫表型CD3+CD8+、CD3+CD56+的表达率Ag-DC-CIK组高于DC-CIK组、DC组及CIK组（P＜0.05）。Ag-DC-CIK、DC-CIK、CIK3组均可诱导乳腺癌CTCs凋亡，凋亡率为（56.83±3.07）％、（31.43±1.77）％、（24.70±1.51）％，两两比较差异有统计学意义，透射电镜可见诱导凋亡乳腺癌CTCs的典型微结构。结论磁珠分选联合细胞免疫学方法可以提高乳腺癌CTCs的检测灵敏度；经抗原冲击DC明显增加CIK细胞的增殖能力和细胞毒活性,有可能作为一种临床有效的抗乳腺癌复发与转移的免疫治疗手段。