关键词：宇佐美曲霉；β-甘露聚糖酶；基因；调控序列；T载体介导的PCR
摘 要：建立了一种利用限制性内切酶酶切、pUCm-T载体连接和巢式PCR技术,基于部分已知DNA序列测定其两侧翼未知DNA序列的新方法,命名为T载体介导的PCR技术,并将此技术应用于宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的β-甘露聚糖酶基因(Aus man5A)5'和3 ′端调控序列的克隆.结果表明:该PCR技术具有操作简便、引物特异性强、结果验证简捷、操作限制少等特点；借助于T载体介导的PCR技术、分子克隆和序列测定等手段,成功地测定了Aus man5A两侧翼的调控序列.