关键词：Keap1;shRNA;慢病毒;PC3细胞
摘 要：目的:针对Keap1构建shRNA慢病毒干扰载体,并评价慢病毒介导的RNA干扰在人前列腺癌细胞PC3中的基因沉默效应。方法:利用生物信息学方法设计针对Keap1的RNAi寡聚核苷酸序列;采用慢病毒载体构建Keap1的shRNA载体,利用大肠杆菌进行重组表达,利用293T细胞包装得到重组腺病毒;依据绿色荧光蛋白(GFP)示踪,逐孔稀释法确定转染效率及滴度;以实时荧光定量法比较各靶序列的基因干扰效果。结果:筛选了所构建的4个Keap1靶向序列,以慢病毒载体构建完成对应Keap1的shRNA质粒。通过瞬时转染筛选得到效率最佳(干扰效率达到80%)的靶序列和工作条件。结论:本研究成功构建并筛选了针对K...
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