关键词：胡子鲇；P450芳香化酶基因；RT-PCR；性腺分化；表达
摘 要：采用RT-PCR和RACE法,克隆了胡子鲇(Clarias fuscus)脑型芳香化酶基因Cyp19a1b,应用荧光实时定量PCR检测其在前脑、下丘脑、脑垂体、肝、精巢和卵巢6种组织,以及性腺分化前后(出膜后12～30d)全鱼中的mRNA表达.结果表明,Cyp19a1b cDNA全长2 347 bp,5’端非编码区219 bp,3’端[不包括poly(A)]596 bp,开放阅读框(ORF)1 503 bp,编码500个氨基酸,推测其编码蛋白质分子量为56.388 kD.序列分析及分子系统进化树结果表明,胡子鲇Cyp19a1b氨基酸序列与非洲鲇(Clarias gariepinus)Cyp19a1b同源性最高,达95.6％；与南方大口鲇(Silurus meridionali)、黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)、斑马鱼(Danio rerio)、斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)、赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)、鲤(Cyprinus carpio)、鲫(Carassius auratus)及稀有鮈鲫(Gob iocypris rarus) Cyp19a1b同源性达75％以上,但与上述鱼类的性腺型芳香化酶基因(Cyp19a1a)同源性低于62％,表明其为脑型芳香化酶,同源性分析结果与根据传统形态学和生化特征分类的结果相一致.荧光实时定量PCR结果显示,Cyp19a1b在胡子鲇上述组织中均有表达,其中下丘脑中表达量最高,肝和精巢最低,在脑部的表达存在明显的性别差异(P＜0.05).此外,在胡子鲇性腺分化前(出膜后12 d)Cyp19a1b即开始表达,但分化前后表达量无显著性差异(P＞0.05).结果暗示Cyp19a1b可能不是引起胡子鲇性腺分化的直接因素,但其可能通过“下丘脑-垂体-性腺轴”对性腺分化过程产生间接影响.