关键词：鸡;骨钙素;pET-32a(+);Rosetta-gami(DE3) pLyS;蛋白表达;羟基磷灰石;成骨细胞;chicken;osteocalcin;pET-32a (+);Rosetta-gami (DE3) pLyS;protein expression;hydroxyapatite;osteoblast
摘 要：为获得具有生物活性的骨钙素蛋白,以鸡颅骨提取的总RNA为模板,RT-PCR法克隆鸡骨钙素成熟肽DNA,连接至原核表达载体pET-32a(+),构建表达质粒pET-32a(+)-rchOC.质粒转化Rosetta-gami(DE3) pLyS宿主菌,IPTG诱导表达含His标签的重组蛋白His-rchOC.肠激酶酶切去除融合蛋白中的His标签后获得重组骨钙素蛋白(rchOC).通过与羟基磷灰石结合试验、MTT及PNPP法分析该蛋白生物学活性.结果显示:重组骨钙素蛋白能与羟基磷灰石结合,抑制成骨细胞中碱性磷酸酶的表达,但不影响成骨细胞的增殖.结论:经原核表达系统已成功获得鸡重组骨钙素蛋白,且该蛋白具有生物活性.