关键词：仿刺参；P450cl7；基因克隆；序列分析
摘 要：本研究克隆了仿刺参(Apostichopus japonicus)P450c17基因的全长cDNA,结果表明其cDNA的5′端UTR为256 bp,3′端UTR为250 bp,ORF为l 530 bp.在3′端有特殊序列ATTTA、终止密码子TAA和polyA加尾.其全长cDNA编码509个氨基酸的前体蛋白,预测蛋白分子量57.6 kD,理论等电点5.5.P450c17的氨基酸序列存在长度为25个氨基酸的信号肽,1个长度为22个氨基酸的跨膜区,1个糖基结合位点NHS,1个P450特有的结构域,其氨基酸序列具有明显的细胞色素P450基因家族的特征.结构域中亚铁血红素结合域中的精氨酸R和发挥活性所必须的半胱氨酸C都是保守的.这些结构组成了血红素结合环、质子传递槽和K螺旋及绝对保守EXXR基序.蛋白前体二级结构中无规则卷曲占41.22％,延伸链占12.77％,α-螺旋占46.01％,不含B-折叠.氨基酸序列与其他物种氨基酸序列的同源性在35％～41％之间.系统进化树表明仿刺参与长牡蛎(Crassostrea gigas)及文昌鱼(Branchiostoma belcheri)聚为一支,黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)、鲇(Clarias gariepinus)、日本鳗鲡(Anguilla japonica)及白斑角鲨(Squalus acanthias)聚为一支,三刺鱼(Gasterosteus aculeatus)、金眼门齿鲷(Stenotomus chrysops)、斑马鱼(Danio rerio)、鲤(Cyprinus carpio)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)、牙鲆及青鳉(Fundulus heteroclitus) 聚为一支.研究结果为进一步探讨仿刺参P450c17在性激素调控性别分化方面的功能提供参考.