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猪源Mx1基因的原核表达及其抗血清制备
作者:何丹妮;周斌;张小敏;陈溥言;庞然;赵津 作者单位:南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏南京210095;南京可莱威饲料有限公司,江苏南京211134 加工时间:2014-02-15 信息来源:《南京农业大学学报》
关键词:猪源Mx1基因;原核表达;抗血清
摘 要:利用1对特异性引物,从pT-poMx1中扩增出Mx1基因开放式阅读框(1 992 bp),并将其编码区插入到携带GST标签的原核表达载体pGEX-6p-1中,经酶切和序列测定后,重组质粒pGEX-poMx1转化陶大肠杆菌BL21( DE3),利用IPTG诱导表达融合蛋白并分析表达效果.结果表明:经终浓度为0.8 mmol· L-1 IPTG诱导后4h,猪源Mx1基因(poMx1)在BL21(DE3)中获得高效表达,表达量占菌体蛋白的32.6%,SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量为99×103.将目的蛋白切胶后免疫Balb/c小鼠,制备了特异性多抗血清,Western blot结果显示该抗血清与融合蛋白孵育反应后有明显的特异性条带.结论:poMx1基因表达成功.
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