关键词：茶树；肉桂酸4-羟基化酶；启动子；表达分析；真核表达
摘 要：肉桂酸4-羟基化酶（Cinnamate 4-hydroxylase, C4H）是茶树苯丙烷代谢途径中的关键酶，能够影响木质素和类黄酮等次级代谢物的生物合成。本文采用5′-RACE 技术，克隆了茶树肉桂酸4-羟基化酶基因（CsC4H）的全长序列，其中开放阅读框长1 518 bp，编码505 个氨基酸，推测蛋白分子量为58.15 kD，理论等电点为9.29。利用基因组步移技术克隆得到该基因上游1 840 bp 的启动子序列。该启动子区域除了分布有TAAT-box 和CAAT-box 等基本转录元件外，还存在多个诱导型和组织特异型的顺式作用元件。实时荧光定量PCR 结果表明该基因在芽、叶、茎、根中都有表达。将该基因重组至表达载体pYES-DEST52 上，并在酿酒酵母WAT11 中进行真核表达。利用LC-MS 方法检测酶反应产物，结果表明目的蛋白能够催化肉桂酸生成p-香豆酸。