关键词：宇佐美曲霉;环氧化物水解酶;侧翼未知DNA序列;基因克隆;生物信息学分析;Aspergillus usami;epoxide hydrolase;unknown flanking DNA sequence;gene cloning;bioinformatics analysis
摘 要：环氧化物水解酶(Epoxide hydrolase,EH)是酶法拆分消旋体环氧化物,制备光学活性环氧化物和邻二醇的重要酶之一.通过RT-PCR和新构建的THSO-PCR侧翼未知DNA序列扩增技术,克隆了一种来源于宇佐美曲霉(A spergillus usamii)E001的EH基因,命名为Aueh2 (GenBankNo.KF061095),并对该基因进行了相关生物信息学分析.Aueh2的DNA序列长度为2 481 bp,其中包含了5'端和3'端侧翼调控序列,6个内含子序列和编码cDNA序列.开放阅读框序列长度为1 188 bp,编码395个氨基酸,对应的蛋白质命名为AuEH2;该蛋白质为无信号肽的亲水蛋白质,其理论相对分子质量44.6 kD;其三维结构包含EH典型的“α/β”核心催化结构域和“帽子”结构域,活性中心由催化三联体Asp191、His369和Glu343组成.本课题研究成果为深入研究AuEH2及其应用奠定了基础.