关键词：成骨细胞；破骨细胞；骨保护素；核因子κB受体活化因子；RNA,信使；基因表达
摘 要：目的:探讨成骨细胞中破骨细胞分化抑制因子(OCIL)基因敲减后护骨素(OPG)和核因子κB受体活化因子配基(RANKL)mRNA的表达水平及其对破骨细胞分化的影响.方法:构建OCIL特异性shRNA表达载体并转染至细胞,分为pRNAT-N1组、pRNAT-N2组、pRNAT-N3组和阴性对照转染组.考察与阴性对照转染组比较,各组对OCIL mRNA水平的抑制率.将对OCIL mRNA干扰效果最佳的shRNA表达载体(pRNAT-N1组)和对照载体pRNAT-U6.1/Neo/CTL(control组)分别瞬时转染UMR106细胞,考察2组RANKL和OPG表达水平.各转染组条件培养基干预骨髓细胞后,观察PBS+control shRNA(vehicle组)、PTH+control shRNA(PTH组)及PTH+ OCILshRNA(shRNA组)破骨细胞样细胞(OLC)数量.结果:(1)与阴性对照转染组比较,pRNAT-N1、pRNAT-N2、pRNAT-N3对OCIL mRNA水平抑制率分别为64％、28％和59％.(2)pRNAT-N1转染UMR106成骨细胞后,RANKL mRNA表达水平明显升高,而OPG mRNA表达水平明显降低,转染后24 h RANKL:OPG比值较control组升高5.1倍.(3)vehicle组、PTH组及shRNA组OLC数分别为(1.83±0.75)个/孔、(49.67±6.77)个/孔及(65.50±7.34)个/孔,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:RANKL/OPG系统参与了OCIL对破骨细胞分化的调节作用.