关键词：成骨分化;;机械刺激;;微小RNA-199a;;胰岛素样生长因子1
摘 要：目的 ：探讨微小RNA (miR)-199a在机械牵张力刺激下MC3T3-E1细胞中的表达变化及其对牵张力刺激MC3T3-E1细胞成骨分化的作用机制。方法：对体外培养的MC3T3-E1细胞加载12%牵张力0、3、6、12和24 h后，利用碱性磷酸酶（ALP）活性检测试剂盒检测ALP活性，实时荧光定量PCR检测骨钙素（OCN）、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)、Runt相关转录因子2(Runx2) mRNA和miR-199a的表达。将MC3T3-E1细胞分为对照组、牵张力组、牵张力+miR-NC组和牵张力+miR-199a组，加载12%牵张力和转染miR-199a模拟物后，观察miR-199a和OCN、OSX、Runx2 mRNA及蛋白表达以及ALP活性。茜素红S(ARS)染色观察钙结节形成能力。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-199a与胰岛素样生长因子1 (IGF1)的靶向关系，实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测miR-199a模拟物对IGF1 mRNA和蛋白表达的影响。采用SPSS 24.0软件包对数据进行统计学分析。结果：与0 h时间点相比，以机械牵张力刺激3、6、12和24 h后，MC3T3-E1细胞ALP活性和OCN、OSX、Runx2 mRNA表达水平均显著升高，而miR-199a表达水平显著降低（P0.05）；与牵张力+miRNC组相比，牵张力+miR-199a组细胞中miR-199a表达水平显著升高，而细胞ALP活性、OCN、OSX、Runx2 mRNA及蛋白表达水平、钙结节形成水平均显著降低（P<0.05）。结论：miR-199a可抑制机械牵张力刺激诱导的MC3T3-E1细胞成骨分化，其作用机制可能与靶向调控IGF1表达有关。
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