关键词：常温机械灌注;;心脏死亡供体器官;;热缺血损伤
摘 要：目的通过建立大鼠心死亡供肾常温机械灌注(normothermic mechanical perfusion, NMP)模型, 探讨空气氧合NMP和氧气氧合NMP对心死亡供肾损伤修复的影响。方法取12只12～14周龄的健康雄性SD大鼠, 建立大鼠心脏死亡供体器官捐献(donation after cardiac death, DCD)模型。大鼠肾脏在热缺血损伤30 min并冷保存8 h后, 采用随机数字表法随机分为使用氧气氧合NMP(O组, 6只)、空气氧合NMP(A组, 6只)2 h。另取相同数量大鼠, 采用随机数字表法随机平分为开腹即获取肾组织的假手术组(C组, 6只)和心死亡后仅静态冷保存8 h的心死亡肾脏静态保存组(SCS组, 6只)作为O组和A组的对照。微板法检测肾灌注液损伤指标肌酐(Cr)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)水平变化, HE染色评定肾组织中肾损伤指标, 免疫组织化学和蛋白质印迹法检测髓过氧化物酶(MPO)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达, 酶联免疫吸附法检测TNF-α和IL-6水平, 硫代巴比妥酸和WST-8法测定脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。采用t检验和单因素方差分析比较组间变量的差异。结果氧气氧合NMP体系(O组)的肾动脉处灌注液氧分压为(576.3±68.2)mmHg, 空气氧合NMP体系(A组)氧分压为(137.0±39.1)mmHg, 组间比较, 差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示, SCS组、O组和A组的病理损伤评分分别为(7.0±0.1)分、(5.0±0.9)分和(2.5±0.5)分, SCS组肾损伤评分显著高于后两组, 组间差异均有统计学意义(P均<0.05);A组评分亦较O组显著降低, 差异亦有统计学意义(P<0.05)。O组供肾NMP前后灌注液的△Cr、△AST、△LDH分别为(43.9±52.8)μmol/L、(532.3±52.8)U/L和(9998.0±2014.4)U/L, A组上述指标分别为(12.6±3.5)μmol/L、(49.1±50.4)U/L和(1477.0±810.4)U/L, 均较O组显著降低, 且差异均有统计学意义(P均<0.05)。O组灌注后肾组织中MDA含量和SOD活力分别为(0.192±0.018)mmol/g和(0.6±0.3)×103 U/g, A组为(0.162±0.023)mmol/g和(1.7±0.4)×103 U/g;O组TNF-α和IL-6水平分别为(124.376±19.635)ng/g和(4.038±1.026)×103 ng/g, A组为(89.331±13.123)ng/g和(1.774±0.518)×103 ng/g。与O组相比, A组肾组织中MDA含量及TNF-α和IL-6水平降低、SOD活力升高, 组间差异均有统计学意义(P<0.05)。半定量分析结果显示, A组MPO和ICAM-1组织表达均较O组显著降低, 差异有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠空气氧合NMP, 可有效模拟肾灌注氧气压力的生理状态, 降低氧化应激和炎症损伤, 更有利于DCD供肾缺血损伤的修复。
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