关键词：逆转录环介导等温扩增;单核细胞增生李斯特氏菌;快速检测;肉类食品
摘 要：作者旨在探讨逆转录环介导等温扩增（reverse transcription–loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP）技术在检测单核细胞增生李斯特菌感染的肉类食品中的效果评价。根据RT-LAMP原理，以iap基因为靶基因设计引物，检测肉制品中的单核细胞增生李斯特菌，并将该方法的特异性、灵敏度、死菌活菌鉴别效果与国标进行对比。实验获得的RT-LAMP体系最佳参数为63℃扩增60 min，反应体系中引物的最佳浓度为外引物0.4μmol/L和内引物0.8μmol/L，以及MgSO₄2.0 mmol/L、甜菜碱1.0 mol/L、dNTPs 2.0 mmol/L、AMV逆转录酶10 U/μL、Bst DNA聚合酶320 U/mL。该试验的灵敏度为每管7.3×101CFU，是LAMP的2倍。特异性实验显示该方法仅检测单增李斯特菌的靶基因，无假阳性。用RT-LAMP和中国国家标准GB4789.30—2016检测市售肉样品（n=100）中单核细胞增生李斯特菌的能力相似，且RT-LAMP仅对活菌有扩增作用。死菌活菌鉴别实验显示该法可以排除肉样中死菌的干扰。经与国标方法做对比，可知RT-LAMP可作为一种有效的检测手段。
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