关键词：感染后肠易激综合征;;肠机械屏障;;白术;;防风
摘 要：背景:肠粘膜机械屏障是感染后肠易激综合征(PI-IBS)的关键病理环节。痛泻要方是治疗PI-IBS使用频率较高的方剂,目前痛泻要方全方及方中单味药药效与作用机理研究多,其中针对肠粘膜机械屏障损伤的作用研究较少。白术/防风药对为痛泻要方中的核心药对,白术补脾燥湿;防风祛风散湿,两药合用具有“补散兼施,固肠止泻”之协同功效。但白术防风合用协同增效保护PI-IBS肠粘膜机械屏障的作用及其作用机制研究尚未阐释。目的:通过研究白术、防风、白术/防风药对对PI-IBS大鼠肠粘膜机械屏障的影响及对肠Caco-2细胞屏障损伤模型的作用,获得白术/防风药对协同保护肠屏障的证据。并从PAR-2/CaM/MLCK信号通路介导的肠Caco-2细胞屏障损伤模型来探讨白术/防风药对协同保护肠屏障的分子机制,阐释白术/防风协同增效保护肠屏障的科学内涵,为揭示其保护肠屏障的机制提供实验依据。方法:采用福氏痢疾杆菌灌胃法建立PI-IBS大鼠模型。将PI-IBS大鼠分为模型组,白术高、中、低剂量组,防风高、中、低剂量组,白术/防风药对高、中、低剂量组,盐酸阿洛司琼组(阳性药组)共11组,另设空白对照组,连续给药2周。记录PI-IBS大鼠稀便次数,测定大鼠内脏疼痛的压力阈值,评价药物对PI-IBS大鼠的治疗作用;免疫酶联(ELISA)法检测大鼠结肠炎症因子IL-6、IL-8水平;Western Blot检测大鼠结肠粘液蛋白Mucin-1的表达水平,探讨白术、防风、白术/防风药对对PI-IBS大鼠肠粘液蛋白分泌的影响;免疫荧光法检测大鼠结肠机械屏障Occludin、Claudin-1紧密连接蛋白的表达变化,探讨白术、防风、白术/防风药对对PI-IBS大鼠肠粘膜机械屏障紧密连接蛋白的影响。建立肠Caco-2细胞屏障损伤模型,MTT法确定白术、防风、白术/防风药对的给药剂量;将白术/防风药对设立1:2,1:1,2:1,3:2四个比例,通过测定四个比例对细胞跨膜电阻(TEER)和荧光黄透过率(PFP)的影响来确定白术防风的配伍比例;确定比例后,给予白术单味药、防风单味药、白术/防风药对预处理Caco-2细胞屏障损伤模型。测定Caco-2细胞屏障损伤模型的TEER值和PFP值,评价肠屏障通透性;台盼蓝法检测细胞存活率,采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞培养上清LDH的活性,评价细胞膜完整性;ELISA法检测细胞内MLCK活性;应用Q-PCR技术和Western Blot技术分别检测PAR-2基因,CAM蛋白和ZO-1蛋白的表达。结果:与模型组相比较,防风高、中、低剂量组和白术高、中剂量组,PI-IBS大鼠内脏疼痛(抬腹和拱腹)压力阈值都显著升高(P<0.05),且其压力阈值回升的程度相比高于防风、白术单味药组(P<0.05);防风和白术高、中剂量组对PI-IBS大鼠均具有止泻作用(P<0.05),且止泻效果优于防风、白术单味药组(P<0.05),增加结肠粘液蛋白Mucin-1的表达(P
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