关键词：日本落叶松；小RNA；文库；miRNA；转录组
摘 要：以2年生日本落叶松实生苗为材料构建其小RNA文库,对283个克隆进行POR验证后测序,通过生物信息学分析鉴定文库中的microRNA并进行qRT-PCR验证.结果表明:(1)小RNA文库的体积为50 mL,总库容量为5.25×106 cfu,重组率为92.6％,插入片段长度约65 bp,与小RNA连接片段长度吻合.(2)去除rRNA(86个)、tRNA(14个)等非目的序列后,获得日本落叶松28个保守miRNAs,属于17个miRNA家族;其中,15个miRNAs(miR159c、miR160a、miR162a、miR164b、miR165a、miR166a、miR166a*、miR166b*、miR169a、miR169b、miR171a、miR171b、miR172a、miR319b、miR396a)的序列与其它植物完全一致,其余13个miRNAs(miR156a、miR159a、miR159b、miR164a、miR166b、miR168a、miR169b*、miR319a、miR396b、miR408、miR482a、miR2111、miR3701)则高度相似.(3)测序结果与本室落叶松转录组数据进行序列比对,新发现4个miRNAs (lle-miR1、lle-miR2、lle-miR3、lle-miR4)及其前体.(4) qRT-PCR验证表明,miR159a、miR159b等16个保守的和lle-miR1～lle-miR4等共20个miRNAs存在于日本落叶松中.(5)通过靶基因预测及UniProt数据库分析发现,32个miRNAs中有24个对应69个靶基因,其功能主要为转录因子、信号转导、胁迫抗性和代谢相关酶及未知功能蛋白.