关键词：低温机械灌注;;PI3K/Ak信号通路;;缺血再灌注损伤;;细胞凋亡
摘 要：目的:建立大鼠心脏死亡肝脏模型,探讨低温机械灌注与单纯冷保存对大鼠肝脏PI3K/Akt信号通路的影响及其作用。方法:将18只SD大鼠随机分为正常对照组(normal control,NC)、单纯冷保存组(cold storage,CS)和低温机械灌注组(hypothermic machine perfusion,HMP),每组6只,进腹后剪开膈肌建立心脏死亡动物模型,观察并记录各组大鼠心脏停跳时间,NC组在心脏停跳时随即获取肝脏,随后经肝门静脉套管与离体常温灌注系统(isolated perfused rat liver,IPRL)连接模拟肝移植再灌注2小时;CS组和HMP组则在心脏停跳后等待30分钟再获取肝脏,随后分别行单纯冷保存3小时或者低温机械灌注3小时,再经肝门静脉套管与离体常温复灌系统连接模拟肝移植再灌注2小时。复灌过程中,PE管收集并记录各组肝脏胆汁生成量与时间,并每隔1小时经肝上上腔静脉收集KHB灌注液1ml行肝酶检测。模拟再灌注(2h)结束后留取肝脏组织标本行病理学检查;蛋白质印迹法(western blot)检测肝脏组织Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax蛋白的相对表达水平;TUNLE法观察肝脏组织细胞凋亡情况。结果:各时间点灌注液肝酶检测,CS组和HMP组谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)较NC组均明显升高(p<0.001),但HMP组较CS组明显降低(p0.05)。肝脏组织病理学检查:NC组肝脏组织细胞形态大致正常,肝索结构完整,未见明显细胞肿胀、坏死;CS组肝细胞损伤较为严重,肝脏细胞肿胀明显,细胞胞浆疏松,胞核溶解,周围伴炎性细胞浸润;HMP组肝窦略扩张,可见部分水肿肝细胞,较CS组更少的坏死。肝脏组织蛋白质印迹实验结果显示:HMP组和CS组p-Akt/Akt较NC组均显著升高(p<0.001),但HMP组升高更明显(p<0.001),但HMP组较NC组显著降低(p<0.001)。TUNLE法检测:CS组和HMP组肝脏凋亡率明显高于NC组(p<0.01),但HMP较CS组显著降低(p
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