关键词：烟草；非特异性脂质转移蛋白基因；克隆；表达分析；生物信息学
摘 要：为了阐明非特异性脂质转移蛋白基因NtLTP1.1在烟草抗病抗逆反应中的功能,用cDNA末端快速扩增技术(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)从普通烟草中克隆了该基因全长,并通过生物信息学方法分析了cDNA序列结构、蛋白理化性质、保守基序、三级结构以及系统进化关系;利用qRT-PCR检测了该基因在不同组织中的表达模式以及胁迫条件下的表达差异。结果表明:NtLTP1.1基因全长615 bp,编码蛋白含有129个氨基酸,为一种小分子碱性可溶性蛋白。蛋白序列N端含有信号肽,预测其可能定位于分泌途径中。Blast比对结果显示,烟草非特异性脂质转移蛋白与番茄nsLTP1序列相似性最高,含有8CM保守基序(8个半胱氨酸残基组成的保守基序)。蛋白三级结构预测表明,NtLTP1.1具有nsLTP典型的三级结构,包括4个α-螺旋,4对二硫键,1个可结合和容纳脂质分子的疏水腔。多重比对结果显示,NtLTP1.1 8CM结构域模式为C1-X9-C2-X13-C3C4-X19-C5XC6-X22-C7-X13-C8。系统进化分析结果表明,nsLTP进化形成5类,NtLTP1.1属于Type I。表达模式分析显示,NtLTP1.1基因主要在烟草叶片中表达,具有明显的组织表达特异性。在低温胁迫条件下表达受到抑制,在水杨酸诱导条件下表达上调。因此,推测NtLTP1.1基因可能在烟草防御反应中发挥作用。