关键词：软骨细胞;;机械应力;;自噬;;LncRNA-MEG3
摘 要：目的1.探索IL-1β诱导软骨细胞发生炎症反应的适宜浓度并观察IL-1β对软骨细胞自噬的影响;2.观察机械应力对炎性软骨细胞表型及自噬的影响;3.观察机械应力对炎性软骨细胞中Lnc RNA-MEG3表达的影响,初探机械应力调控炎性软骨细胞自噬的机制。方法1.分离并体外培养新生大鼠膝关节软骨细胞,分别用0 ng/m L、1 ng/m L、2.5ng/m L、5 ng/m L、10 ng/m L、15 ng/m L IL-1β干预软骨细胞,Real-time PCR和Western Blot检测II型胶原(Col-2)、基质金属蛋白酶(MMP13)、自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达;2.用四点弯曲细胞力学加载仪对IL-1β处理的软骨细胞加载1Hz不同强度的力学刺激2小时,Real-time PCR和Western Blot检测II型胶原(Col-2)、自噬相关蛋白p-m TOR、LC3、Beclin-1;自噬双标腺病毒转染软骨细胞,力学干预后荧光显微镜下检测自噬小体的形成。3.用四点弯曲细胞力学加载仪对IL-1β处理的软骨细胞加载1 Hz不同强度的力学刺激2小时,Real-time PCR检测MEG3的表达的变化;si-RNA沉默MEG3,Real-time PCR检测LC3、Beclin-1的表达。结果1.梯度浓度IL-1β处理大鼠膝关节软骨细胞,Col-2表达量与IL-1β浓度呈负相关,MMP13表达量与IL-1β浓度在一定范围内呈正相关;LC3及Beclin-1的表达量在一定范围内高于对照组,p-m TOR在IL-1β干预组的表达量均高于对照组。2.机械应力干预5 ng/m L IL-1β处理的软骨细胞后,2000μstrain组Col-2及LC3基因表达量较无应力组及5000μstrain组上调,差异具有显著性(P<0.05);自噬双标腺病毒转染软骨细胞,力学干预后荧光显微镜下观察到2000μstrain组自噬小体形成较对照组及5000μstrain组增加,差异具有显著性(P
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