关键词：nesprin2;;机械张力;;成纤维细胞;;增生性瘢痕
摘 要：目的研究抑制nesprin 2基因表达能否对机械张力导致增生性瘢痕的形成产生抑制作用,从而探究在机械张力导致正常皮肤成纤维细胞向增生性瘢痕成纤维细胞转化的过程中,nesprin 2发挥的作用。为探索机械张力信号在细胞内传导并调节靶基因表达的具体机制提供基础。方法取人体正常皮肤真皮组织,应用组织块法体外分离培养正常皮肤成纤维细胞,取第4-6代细胞进行实验。将细胞分为抑制nesprin 2表达和不抑制nesprin 2表达的两组细胞,抑制nesprin 2表达的细胞利用脂质体转染法转染siRNA,不干扰nesprin 2基因的细胞转染siRNA阴性对照,以确定和目的靶细胞中其它基因没有同源性。细胞成功转染siRNA 24h后,将抑制nesprin 2基因表达和不抑制nesprin 2基因表达的正常皮肤成纤维细胞分别设实验组和对照组,共4组,其中,实验组细胞置于多通道应力加载系统,对细胞加载0.1Hz、10%拉伸幅度、正弦波形的周期性机械张力,每日加力时间共10h,加载机械张力的总时间为3d。对照组细胞不加载机械张力,仅做正常培养。加载机械张力3d后,对各组细胞进行各项检测:倒置显微镜下观察细胞形态;SYBR Green qPCR法检测细胞nesprin 2、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、Ⅰ型胶原的mRNA表达水平;ELISA法检测细胞上清液中TGF-β_1和Ⅰ型胶原的含量;Western-Blot检测细胞lamin A+C、α-SMA蛋白表达水平。结果抑制nesprin 2基因的实验组及对照组的nesprin 2、lamin A+C的表达水平均分别低于不抑制nesprin 2基因的实验组及对照组,差异有统计学意义(P
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