关键词：B细胞激活因子；cDNA克隆；原核表达；蛋白纯化
摘 要：目的本研究对TNF家族B细胞激活因子(B cell activating factor to the TNF family,BAFF)的胞外区134~285位氨基酸残基进行克隆,构建原核表达载体pET21a-s BAFF,并进行表达及纯化。方法 以K562细胞系的cDNA为模板,采用PCR扩增s BAFF基因,构建pET21a-s BAFF。在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达sBAFF,超声碎菌,提取包涵体,经Ni2+-IDA亲和层析纯化,复性,采用SDS-PAGE鉴定纯化产物。结果 通过优化确定了目的蛋白适宜的诱导温度和诱导时间。表达的s BAFF相对分子量约为18000,目的蛋白占菌体总蛋白的38.59%,且主要以包涵体的形式存在。经过蛋白复性后有38.14%的sBAFF聚合成了有活性的三聚体,代表错误折叠的二聚体含量极低。结论 建立了成功的复性工艺,目的蛋白经过复性后形成具有活性的三聚体,为进一步研究BAFF的生物学功能以及以BAFF为靶点的自身免疫疾病药物开发奠定了基础。