关键词：多功能淀粉酶;表达;信号肽;结构;功能;Multifunctional amylase;Expression;Signal peptide;Structure;Function
摘 要：将编码枯草杆菌BS168的amyE信号肽(S)的基因与编码多功能淀粉酶OPMA-N和OPMA-G的基因重组,分别构建了分泌表达多功能淀粉酶OPMA-N和OPMA-G的重组载体pMA5-OPMA-SN和pMA5-OPMA-SG,并分别在枯草杆菌BS168中实现了OPMA-SN和OPMA-SG的有效分泌表达.SDS-PAGE分析表明,该信号肽的引入提高了异源蛋白的分泌量,OPMA-SN和OPMA-SG的分泌水平(53％和67％)比OPMA-N和OPMA-G(45％和58％)明显提高,但此信号肽在分泌表达OPMA-N或OPMA-G后不能被有效切除.活力分析表明,OPMA-SN(5.17 U/mg)和OPMA-N(4.57 U/mg)的活力水平与分泌水平一致,但OPMA-SG(4.50U/mg)和OPMA-G(4.65 U/mg)的活力水平却与分泌水平呈反相关性.通过分析OPMA-SN和OPMA-SG分子的空间构象发现,信号肽的存在不影响OPMA-N的活性部位构象,但影响OPMA-G的活性部位构象,从而导致OPOMA-G的催化活性下降.