关键词：参苓白术散;;皮肤机械屏障;;神经酰胺;;代谢途径
摘 要：目的:本课题通过胶带剥离法复制皮肤机械屏障功能障碍小鼠模型,探讨健脾利湿的代表方参苓白术散修复皮肤机械屏障功能的作用,并从神经酰胺代谢途径探讨其作用机制,为健脾利湿法用于临床治疗皮肤屏障功能障碍皮肤病提供依据。方法:1.参苓白术散对皮肤机械屏障功能障碍小鼠皮肤的修复作用将ICR小鼠随机分为空白组、模型组、参苓白术散10g/kg、20g/kg、40g/kg剂量组,参苓白术散各剂量组从第1天起分别灌胃给予不同剂量参苓白术散水煎液,其余各组灌胃给予蒸馏水,1次/天,连续13天;从第9d起采用胶带剥离法复制皮肤机械屏障功能障碍小鼠模型,2次/天,连续5天;各组动物于造模前1天、造模1天及造模5天,分别采用皮肤生理测试仪测量TEWL值、皮肤水合度、皮肤p H值及皮肤弹性值;造模5天后,处死各组动物取颈背部皮肤组织,采用HE染色法观察皮肤病理组织形态学变化并测量表皮厚度;以评价参苓白术散对小鼠皮肤机械屏障功能的修复作用。2.参苓白术散对皮肤机械屏障功能障碍小鼠皮肤修复作用的机制动物分组、造模及给药同第一部分。造模5天后,处死各组动物取颈背部皮肤组织,检测神经酰胺代谢途径相关酶及转运体(ABCA12)的蛋白及m RNA表达,考察参苓白术散对神经酰胺代谢途径的影响,以探讨参苓白术散修复皮肤机械屏障功能的机制。具体方法为:采用Western Blot法检测神经酰胺合成途径相关酶(SPT和SMase)及分解途径相关酶(CDase、CK、SMS、GCS)的蛋白表达;采用免疫组织化学法检测神经酰胺再利用途径转运体(ABCA12)及相关酶(β-GCase和SMase)的蛋白表达;采用Real-time PCR法检测神经酰胺合成途径相关酶(SPT和SMase)、分解途径相关酶(CDase、CK、SMS、GCS)及再利用途径转运体(ABCA12)与相关酶(β-GCase和SMase)的m RNA表达。结果:1.参苓白术散对皮肤机械屏障功能障碍小鼠皮肤的修复作用造模前1天,各组小鼠皮肤TEWL值、水合度、pH及弹性值(R2)均无明显差异。造模1天,模型组小鼠皮肤TEWL值、p H值升高,水合度、弹性值(R2)降低。造模5天,参苓白术散各剂量组均可显著降低模型小鼠皮肤TEWL值,升高模型小鼠皮肤水合度,降低模型小鼠皮肤p H值;参苓白术散40g/kg剂量组可升高小鼠皮肤弹性值(R2);参苓白术散各剂量组对皮肤病理组织形态学变化有不同程度的改善,表现为角质层增厚减少、棘层肥厚情况有所减轻,真皮层炎性细胞浸润明显减少;参苓白术散各剂量组均可降低小鼠皮肤表皮增厚。2.参苓白术散对皮肤机械屏障功能障碍小鼠皮肤神经酰胺合成途径的影响造模5天,参苓白术散各剂量组对皮肤机械屏障功能障碍小鼠皮肤神经酰胺合成途径相关酶(SPT和SMase)的蛋白及m RNA表达无明显作用。3.参苓白术散对皮肤机械屏障功能障碍小鼠皮肤神经酰胺分解途径的影响造模5天,参苓白术散20g/kg剂量组可显著上调皮肤机械屏障功能障碍小鼠皮肤中CDase、CK、SMS2的蛋白及m RNA表达;参苓白术散40g/kg剂量组可显著上调皮肤机械屏障功能障碍小鼠皮肤中GCS的蛋白及m RNA表达;参苓白术散各剂量组对皮肤机械屏障功能障碍小鼠皮肤中SMS1的蛋白及m RNA表达无明显作用。4.参苓白术散对皮肤机械屏障功能障碍小鼠皮肤神经酰胺再利用途径的影响造模5天,参苓白术散20g/kg剂量组可显著上调皮肤机械屏障功能障碍小鼠皮肤中ABCA12和β-GCase的蛋白及m RNA表达,参苓白术散各剂量组对皮肤机械屏障功能障碍小鼠皮肤中SMase的蛋白及m RNA无明显作用。结论:参苓白术散具有修复皮肤机械屏障功能的作用,其机制可能为通过调控神经酰胺代谢途径中相关酶CDase、CK、SMS2与β-GCase及转运体ABCA12,从而提高皮肤神经酰胺的含量。
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