关键词：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱;产毒霉菌;建立数据库;影响因素
摘 要：目的 构建包含9个属15个种15株菌株的食品中常见产毒霉菌基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）鉴定数据库，为标准GB 4789.16—2016《食品卫生微生物学检验常见产毒霉菌的鉴定》中产毒霉菌的鉴定提供补充手段，提高其时效性和准确性。同时探究不同固体培养基、前处理方法、培养时间对15株常见产毒霉菌MALDI-TOF MS鉴定结果的影响。方法 2022年3月—2023年8月，将15株产毒霉菌经沙氏液体培养基28℃培养24 h，利用得到的蛋白谱图建立其数据库。通过建立的数据库比较不同固体培养基、培养时间、前处理方法对其鉴定结果的影响。结果 以圆弧青霉为例，其在沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）、查氏培养基（CA）、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）、孟加拉红培养基（RBC）不同固体培养基的鉴定分值分别为鉴定错误、1.555±0.007、1.875±0.022和2.138±0.048，不同固体培养基对鉴定分值差异有统计学意义（F=88.436,P<0.05）；采用直接涂抹法、甲酸提取法、甲酸-乙腈提取法3种不同前处理方法的鉴定分值分别为1.813±0.008、2.159±0.094和2.138±0.048，不同前处理方法对鉴定分值差异有统计学意义（F=25.852,P<0.05）；在3～7天不同培养时间的鉴定分值分别为2.315±0.037、2.224±0.016、2.138±0.048、2.171±0.016和2.166±0.010，不同培养时间对鉴定分值差异有统计学意义（F=22.893,P<0.05）。对于其余14株常见产毒霉菌，不同固体培养基、培养时间、前处理方法对其MALDI-TOF MS鉴定分值差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 由于细交链孢菌与暗孢节菱孢不能选用PDA作为其鉴定用固体培养基，最终以常见产毒霉菌自建数据库为鉴定平台，采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基于28℃培养4～5天，采用甲酸-乙腈法提取蛋白质进行质谱鉴定，以分值≥1.80的高置信度作为评判标准，可使15株中86.7%的产毒霉菌得到有效鉴定。
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